用高效液相色谱法(HPLC)对山楂中几种水溶性有机酸分析
本文采用高效液相色谱法(HPLC)对山楂中几种水溶性有机酸进行了分析。结果稳定可靠，可为山楂的质量控制提供参考。
1.仪器与试剂
高效液相色谱由,紫外检测器,柱温箱,自动进样器组成。
酒石酸,抗坏血酸,柠檬酸,琥珀酸等有机酸均为纯分析。
磷酸二氢钠及磷酸为分析纯；
水为高纯水；
流动相经0.45um的膜过滤。
2.参考物质和样品溶液的制备
准确称量各有机酸标准物质（草酸12.5 mg、酒石酸25 mg、苹果酸50 mg、抗坏血酸5 mg、柠檬酸250 mg、丁二酸5 mg），加入50毫升水溶解，并用步进稀释法制备一系列混合标准样品。
准确地说，Hawthorn样品粉末(通过0.45mm孔径筛)约为1g，加入适量的水，超声提取0.5h，过滤后将体积固定在50ml容量瓶中，取适量0.45μm滤膜制成样品溶液。
3.色谱条件
色谱柱：ODS2（4.6mm×250 mm，5um）；
流动相：磷酸二氢钠缓冲液(pH=2)。 6）；
流速：0.8mL/min；
检测波长：210nm；
柱温：25℃；
进样量：10uL。
4.实验条件优化
采用纯水萃取法提取水溶性有机酸。提取效率高，方法简单。药典规定的方法是室温浸泡，耗时较长。
本实验采用超声提取法，分别对提取时间为20 min、30 min和40 min的提取率进行了研究。实验结果表明，超声波时间太短，部分物质未提取或提取不足，提取时间过长，色谱图无明显差异。因此，根据色谱峰数、峰面积和经济角度，提取时间应为30min。
对于水溶性有机酸的分离只需有机相的水相即可获得满意的分离效果在此条件下对色谱柱无损伤然而，通常需要将酸抑制剂添加到流动相中以调节pH值以抑制有机酸的解离。
当流动相pH值较低时对硅胶柱的键合相不利，对柱的破坏较大，而当流动相pH>3时，峰基本不分离因此，流动相的pH值为2。6.在有机酸检测波长210 nm下，甲酸和乙酸本身的紫外吸收会干扰有机酸的测定，而磷酸缓冲液在紫外区域的吸收很小。选择磷酸二氢钠和磷酸盐缓冲体系来调节pH值。当流速高时，峰时差小，分离效果差。 8 mL/ min。
