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高效液相色谱法HPLC实验结果的分析

2020.1.08

高效液相色谱和气相色谱法(包括测定方法和计算方法)的定性和定量分析是相同的。定性分析采用纯物质控制的色谱鉴别方法,非色谱鉴别方法结合化学分析或其他仪器分析方法采集组分;定量分析采用峰高或峰面积内标法、外标法或归一化法进行定量,并与计算机结合作为现代分析方法对。

定性分析

色谱方法的定性分析的目的是确定每个色谱峰代表哪些组分,从而确定由这些组分组成的混合物样品的组成常用的定性方法有色谱鉴别法和非色谱鉴别法。

1.色谱鉴定法定性

色谱鉴别法是气相色谱和高效液相色谱中最常用的定性方法之一,可与定量测定操作同时进行。

(1)利用保留值定性

在一定的色谱条件下(包括柱长、柱径、固定相、柱温、流动相、流速等),每种物质都有自己的保留值(包括保留时间、保留体积、保留时间的调整、保留时间的调整等)。体积等),一般不受其他成分影响,可作为定性成分使用。根据。这种方法也被称为纯物质控制。

在相同的色谱条件下,先测定未知物质中各峰的保留时间或保留距离,然后将待测纯物质注入色谱仪。通过比较两种物质的保留值,如果两种物质的保留值相同,则可以确定未知物质与已知纯物质为同一物质。

(2)利用加入纯物质增加峰高法定性

在稳定的色谱条件下,为了区分两个非常接近组分的保留值(保留时间或保留距离),可以直接向样品中加入纯物质,然后注入色谱,如果增加某一组分峰的峰高,则表明该峰是要添加的纯物质。这种方法又称纯物质加性合法。

色谱鉴别方法的特点是需要控制纯物质,在没有纯物质的情况下,色谱鉴别方法可以进行非色谱鉴别。

2.非色谱鉴定法定性

(1)利用文献或相关工具书

任何实验室都不可能通过比较所有物质的保留值来配备纯产品。没有纯物质,就不可能定性。因此,国内外其他实验室的分析化学或色谱分析期刊上可以使用色谱仪发表的具有相对保留值和保留指数(ix)数据的论文。(文学)。早期文献数据已纳入分析化学手册中。只要这些数据能在相同的色谱条件下重现,就可以用于定性分析。

其中一个组分i 的相对保留值是组分i 与另一个标签(碱基)准物质s 的调整保留值之比,即t - ri 是组分i 的调整保留时间,t - s 是标记(碱基)准物质s 的调整保留时间,v - ri 是组分i 的调整保留体积,ml ; V-R 是标记(碱基)准物质s 的调整保留体积。

组分的相对保留仅与固定液,柱温有关,与其他操作条件无关,可参见液相色谱部分或分析化学手册中的相关文献..

在分析化学手册或文献中比较了相同操作条件下的相对保留值。如果被测组分的相对保留值与分析化学手册或文献中的相对保留值相同,则该组分与分析化学手册或文献中的相对保留值相同。

(2)利用保留指数定性

1958年Kovats制作的保留指数I的使用仍被国际公认为最广泛使用的定性参数。规定X物质的保留指数I可由色谱峰和邻区正构烷烃标准物质的相关值(使用均匀标度,不带对数)计算,即正构烷烃的保留指数I等于l到100倍于正构烷烃分子中碳原子z的数量。

保留指数I仅与固定液体的性质有关与其他操作条件无关物质x的保留指数ix也可以通过调整保留距离和体积来计算。

在定性分析中,选取的两种正构烷烃与待测物质均匀混合,并根据“分析化学手册”或文献中规定的固定相和柱温进行色谱分析。色谱峰后所测物质的保留指数IX与“分析化学手册”或文献中已知物质的保留指数(如果与已知物质的保留指数相同)进行比较。可以确定这两者是同一物质。

保留指数的定性分析常用于高效液相色谱的定性分析。

(3)利用化学反应定性

化学反应和色谱分析的结合有利于对含有复杂官能团的组分进行定性分析它可以定性地与柱前、柱后和柱后预处理相结合。

①利用柱前预化学处理法定性

一些含有特殊官能团的化合物可以与特殊的化学试剂反应生成相应的衍生物。经柱前化学预处理后,该化合物的色谱峰消失,或移动,或提前。通过比较治疗前后的色谱图,可以确定该成分属于哪种化合物。

②利用柱中化学处理法定性

将化学试剂涂在载体上,填充在短柱中,并在分析柱前串联,也可在柱前化学处理中起到定性作用。

③利用柱后化学处理法定性

色谱分离后,将流动柱的组分直接引入化学试剂中,观察其颜色变化或沉淀、气体生成等情况,进行定性分析。

④与其他仪器结合定性

采用质谱仪和红外吸收光谱仪对色谱柱中的组分(组分)进行了定性分析。该质谱仪能准确地测量未知物质的相对分子质量灵敏度高红外光谱具有很强的红外吸收潜力,对纯物质具有精细的结构特征。这种组合有利于复杂物质的表征。但由于红外光谱仪的灵敏度不高,需要对lmg样品进行成分分析。

高效液相色谱(HPLC)在化学反应和红外光谱分析中具有一定的优势。由于高效液相色谱(hplc)比气相色谱(gc)具有更多的样品,因此在柱后采集样品中的纯组分比气相色谱(gc)容易得多。在足够大的分离的情况下,当组分被确定为峰值时,测试管从检测器的样品池中填充组分溶液,并且当测试管连接到色谱峰的底部时,测试管被去除。该组分的纯度可通过反复接收该峰的流出液并除去流动相溶剂来获得。如果得到的结果大于LMG,则可以使用红外吸收光谱仪进行定性分析。

在质谱定性分析中,高效液相色谱法并不像气相色谱法那样流行和成熟。

色谱分析也可以与荧光光谱、极谱法、核磁共振谱和其它定性分析方法相结合。

⑤利用经验规律定性

在没有被测组分的纯物质和文献资料的情况下,可以用一些组分的经验规律来表征物质例如在一定温度下有机同系物的保留值的对数与其分子中的碳原子数呈线性关系,即碳数定律。此外,在一定温度下,同系物碳链异构体保留值的对数与其沸点呈线性关系,即沸点定律。在同源碳链异构体中,低沸点组分首先出现但这些法律也有一定的局限性。


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