二苯胺DNA比色法定量测定试剂盒使用说明
主要用途
二苯胺DNA比色法定量测定试剂是一种旨在通过二苯胺与DNA的特异性结合反应，借助可见光波长的吸光峰值的变化，比色测定样品中DNA的绝对含量或浓度的技术方法。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品即到即用，性能稳定，简易方便，无需样品纯化，定量准确。
技术背景
二苯胺（diphenylamine）具有与DNA酸性水解脱嘌呤后释放的脱氧核糖（deoxyribose）转变的ω-羟基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde）特异性反应的功能，形成蓝色复合物。但不与RNA的核糖 （ribose）反应。通过可见光（600nm）吸收可以进行定量分析。因此避免了A260测定的种种限制，例如对样品的纯化要求、对DNA的单链双链的要求和对紫外光UV的需求，以及RNA的干扰。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 8毫升
分解液（Reagent B） 8毫升
反应液（Reagent C） 25毫升
稳定液（Reagent D） 125微升
标准液（Reagent E） 200微升
产品说明书 1份
保存方式
保存稳定液（Reagent D）和标准液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在室温下；其中反应液（Reagent C）和稳定液（Reagent D），具有腐蚀性，注意操作安全，且避免光照，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
恒温水槽：用于反应物孵育
比色皿：用于比色分析的容器
分光光度仪：用于样品比色测定
实验步骤
测定准备
准备好待测样品，置于冰槽里
设定好分光光度仪：波长600nm，并置零
准备好9个1.5毫升离心管，标记为1至9号管
按照下表配制标准液
放进冰槽里备用，避免光照
管号 | 缓冲液（Reagent A） | 标准液（Reagent E） | 标准DNA浓度 |
1 | 0 | 20微升 | 20微克/10微升 |
2 | 5微升 | 15微升 | 15微克/10微升 |
3 | 10微升 | 10微升 | 10微克/10微升 |
4 | 12微升 | 8微升 | 8微克/10微升 |
5 | 14微升 | 6微升 | 6微克/10微升 |
6 | 16微升 | 4微升 | 4微克/10微升 |
7 | 18微升 | 2微升 | 2微克/10微升 |
8 | 19微升 | 1微升 | 1微克/10微升 |
9 | 20微升 | 0 | 0 |
二、比色测定
实验开始前，小心移取6毫升反应液（Reagent C）和30微升稳定液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，混匀后，标记为反应工作液，避免光照。然后进行下列操作。
准备至少10个新的1.5毫升离心管作为测定管：标记9个标准管和1个待测样品管
分别加入140微升缓冲液（Reagent A）到每一个标准管和样品管
分别加入10微升上述配制的标准液（Reagent E）到相应测定管里（注意：浓度和管号对号入座）
加入10微升待测样品到样品管里
分别加入150微升分解液（Reagent B）到所有测定管里
放进70℃干式恒温槽或恒温水槽孵育20分钟
在室温下静置，直至试管温度降温到室温（15至30分钟）
分别加入600微升含有反应液（Reagent C）和稳定液（Reagent D）的反应工作液到所有测定管里
放进37℃培养箱（暗室环境）孵育5小时
即刻分别移入到1毫升比色皿，放进分光光度仪读数：获得吸光读数
构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD）；横座标（X轴）为标准DNA浓度（微克/10微升）
根据标准曲线获得样品对应DNA浓度（微克/10微升）
样品实际DNA浓度：
[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度（微克/10微升）X样品稀释倍数]÷100＝微克/毫升
注意事项
本产品为10次样本操作
操作时，须戴手套
系统操作时，标准样品测定只需1次
反应液（Reagent C）、稳定液（Reagent D）和反应工作液，避免光照
操作时注意安全，尤其在使用反应液（Reagent C）、稳定液（Reagent D）和反应工作液时，十分小心
待测样品无需纯化，包括去蛋白、去RNA等处理
计算实际浓度时，不要忘记待测样品的稀释倍数
使用无水乙醇清洗比色皿
本公司提供系列DNA定量分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定定量准确
