比色法测定磷含量的方法
本法系将有机磷转变为无机磷后进行磷含量测定。磷酸根在酸性溶液中与钼酸铵生成磷钼酸铵，遇还原剂即生成蓝色物质（三氧化钼和五氧化钼的混合物），称之为“钼蓝”，用比色法测定供试品中磷含量。
测定法
精密量取供试品适量（含磷4～20μg）置试管中，加4滴硫酸（约0.08ml）加热至炭化，再加2滴高氯酸（约0.06ml）消化至无色澄清，消化完全后稍置片刻，立即加水2ml，加0.04mol/L钼酸铵溶液（称取钼酸铵5g，加水溶解并稀释至100ml）0.4ml，混匀；加还原剂（称取亚硫酸氢钠6g、亚硫酸钠1.2g、1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.1g，置棕色瓶中，加水至50ml，1周内使用）0.2ml，混匀；加水至6ml，15～20分钟后，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在波长820nm处测定吸光度。
精密量取标准磷溶液（精密称取干燥至恒重的磷酸二氢钾439.3mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；再精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，即得每1ml含磷20μg的标准磷溶液）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置试管中，各补加水至1ml，自本法前述“加4滴硫酸”起，同法操作，测定各管的吸光度。
以标准磷溶液的系列浓度对其相应的吸光度作直线回归，然后将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出其相应体积（ml）。
式中
V为供试品溶液吸光度相对于标准磷溶液的体积，ml；
cR为标准磷溶液的浓度，μg/ml；
VX为供试品的体积，ml。
【附注】（1）加高氯酸消化时，必要时可加1～2滴30%过氧化氢，但最后必须将过氧化氢除尽。
（2）加高氯酸消化后，如在冷却后加水，须再加热。
（3）测定A群脑膜炎球菌多糖疫苗成品磷含量时，至少取3支安瓿溶解后混合备用。
