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关于脂肪干细胞共性培养的分析介绍

2022.10.26

  为脂肪细胞与脂肪干细胞经过20d 共培养后脂肪干细胞的Hoechst/PI 死活染色结果。Hoechst 染料对活的细胞具有特异性染色的特点,PI 则对死细胞特异性染色。从中可以看到,两组中的细胞均呈明亮的蓝色,说明细胞的活性很好。基本上看不到PI 染成红色的死细胞的存在。表明,本实验中,经过共培养后的脂肪干细胞,仍拥有良好的活性。

  研究可以发现,共培养组a,d,g 3 组均未发生明显的成脂分化现象。经过成脂诱导剂诱导的3 个不同接种密度的阳性对照组中均出现成脂分化,成脂分化后的细胞内出现大量密集在一起的小脂滴,当小脂滴达到一定数量后,就会聚合成为较大脂滴。这些成脂分化的现象与文献中报道的脂肪干细胞成脂分化的过程相一致。通过观察c,f,i 3 组未加任何诱导剂,仅仅使用基础培养基培养的脂肪干细胞的阴性控制对照组,可以看到,脂肪干细胞均匀生长于培养界面上,经过20d 的培养细胞的生长状态良好,未发生明显细胞破碎和衰退死亡的改变。

  通过分析可以看到,不同脂肪干细胞与脂肪细胞共培养比例下,共培养组B(共培养比例为1:1)和共培养组C(共培养比例为2:1)的流式结果,与相应的控制对照组B 和组C 相比,CD105 的表达发生下降(b,f,d,h),CD105 表达分别是,共培养组B 为4.8%,对照组B 为12.4%;共培养组C 为1.3%,对照组C 为6.8%。而另外一个间充质细胞的特异性表面标记CD44,(a,c,e,g),共培养组B 中为2.9%,对照组B 中为3.1%,没有显着变化;在另一共培养组C 中为0.9%,对照组C 中为5.4%,发生显着变化。

  通过以上分析发现(f,g),经过共培养的脂肪干细胞,其表面抗原CD105的表达发生明显的降低,其结果接近不表达。CD105作为间充质细胞特异表达的表面抗原发生这一改变意味着,脂肪干细胞在共培养过程中可能发生了一定程度上的分化。

  采用人体吸脂来源的干细胞与脂肪细胞进行共培养,8d 之内不能促使脂肪干细胞成脂分化。且将共培养时间延长至20d 后,仍未能观察到脂肪干细胞发生明显的成脂分化现象。通过流式细胞仪对共培养的脂肪干细胞进行细胞表面抗原标记表达的分析,发现共培养后脂肪干细胞与非共培养对照组相比较,其中间充质细胞特异性表达标记CD105 发生明显降低,这就意味着本实验的共培养过程中,脂肪干细胞内部已发生一定程度的改变。

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