人脐带间充质干细胞的原代取材
实验概要
人脐带间充质干细胞的原代取材
主要试剂
含2% SP的DPBS、间充质干细胞培养液、10 mg/mL胶原酶Ⅰ、0.2% 胶原酶Ⅰ、10 mg/mL透明质酸酶
主要设备
眼科剪、眼科镊、摇床、400目细胞筛、15 mL和50 mL离心管、3.5 cm培养皿
实验材料
新生儿脐带（获得新生儿父母的知情同意）
实验步骤
（1）将脐带浸泡于含2% SP的DPBS中，在冰上运输。
（2）将脐带剪成2 cm左右的小段，用含2% SP的DPBS洗至无血液存在。
（3）剔除脐带中的血管。
（4）将剔除血管后的脐带用眼科剪剪碎成大约1 mm3细小组织块；加入同等体积0.1 % 或 0.2 %（1 mg/mL 或 2 mg/mL）胶原酶Ⅰ消化液，转移至15 mL或50 mL离心管中，再加入透明质酸酶至终浓度为0.2 mg/mL，37℃恒温消化0.5~1 h。
（5）加入与酶液等体积的间充质干细胞培养液，终止消化。
（6）尽量将组织吹散，过400目细胞筛，室温1000 r/min离心10 min。
（7）用间充质干细胞培养液重悬细胞，按每3.5 cm培养皿5×105个细胞的密度接种标记为原代细胞（P0）。
（8）置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。
（9）24 h后更换新鲜的间充质干细胞培养液，去除未贴壁细胞，以后每2～3天更换1次培养液。
（10）待细胞长至80%～90%融合时传代。
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