脐带间充质干细胞原代分离
实验概要
本实验方法介绍了脐带间充质干细胞原代分离的操作步骤。
主要试剂
所用试剂盒：
猪脐带间充质干细胞分离和培养试剂盒 货号：PUMS-000-001
人脐带间充质干细胞分离和培养试剂盒 货号：HUMS-000-001
规格：5次
产品名称 | 货号 | 规格 | 数量 |
（猪/人）脐带间充质干细胞完全培养基 | 200ml/瓶 | 1瓶 | |
PBS | BM-001-500 | 500ml/瓶 | 1瓶 |
双抗 | BS-003-100 | 100ml/瓶 | 1瓶 |
成纤维培养基 | 200ml/瓶 | 1瓶 | |
胶原酶I | EC-002-50 | 50ml/瓶 | 1瓶 |
DNA酶 | EC-003-50 | 50ml/瓶 | 1瓶 |
0.25%胰酶 | ET-002-100 | 100ml/瓶 | 1瓶 |
实验步骤
1. 获得脐带组织。
2. 将脐带组织用含有双倍双抗的PBS漂洗，把血块洗净。
3. 将脐带组织剪成3-125px小段。
4. 横向夹住脐带组织，明显可见2条脐动脉和1条脐静脉。
5. 纵向剖开脐带，露出血管，将血管从周围组织分离出来。
6. 将脐带组织漂洗干净，用眼科剪将组织剪碎。
7. 加1mg/ml的胶原酶I，没过组织块即可，37℃摇床消化1h小时左右，看见基本没大的组织块。
8. 加成纤维细胞培养液终止，并加入DNAase，过40um细胞筛。
9. 离心，1500rpm，15min 。
10. 弃上清，根据获得的细胞量接种细胞即可，一般一根脐带可接种1个250px皿。
11. 4天左右可以传代。
注意事项
1. 注意原材料的新鲜与保鲜。一般取来的材料都是当天来做，而且取材时最好是放在含有双抗的PBS里，用冰盒运输。
2. 取材时要保持严格的无菌操作。
3. 将组织漂洗干净，不要残留血块和毛发。
4. 取材时要选用锋利的手术器械，防止损伤组织。
5. 消化时间要掌握好，控制在大的组织块刚刚完全消化完。
6. 要标记好细胞的品系，周龄，雌雄等信息。
7. 注意要用胶原酶I，而且消化时要加入DNA酶，防止粘稠。
