腺病毒系统常见问题解答
1.什么是Adeno-associated virus (AAV) &重组AAV(rAAV) & helper free rAAV?
腺相关病毒（AAV）属于微小病毒科，是一类小的、二十面体、无包膜病毒。AAV是一种复制缺陷病毒，复制依赖于其他辅助病毒，如腺病毒和疱疹病毒。AAV不编码自己的聚合酶，因此其复制过程依赖于宿主细胞的聚合酶活性。
重组AAV（rAAV）是人工改造的AAV，没有编码AAV病毒复制和结构蛋白的rep和cap基因。rAAV中与复制和包装相关的rep和cap 基因被替换为ITRs间的基因或结构，这使rAAV具有4.1-4.9 kb的包装容量。
2.使用AAV有哪些生物安全性要求?
可在生物安全1级（BSL-1）实验室操作生产无辅助病毒和编码非致癌基因的重组AAV。另外，应在生物安全2级（BSL-2）实验室封闭处理具有生物危害性的材料。
3.重组AAV 安全吗?
迄今为止，未发现野生型AAV有致病性。野生型AAV，在无需辅助病毒（如腺病毒）的存在下，复制效率非常低。重组腺相关病毒（rAAV）由多个质粒（cis质粒、辅助质粒、rep/Cap质粒）组成。Cis质粒、辅助质粒与rep/Cap质粒之间不具有同源性序列，因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。
4.重组AAVs的克隆容量有多大?
AAV具有〜4.7Kb的包装能力。2个ITR之间插入的DNA长度接近允许的最大值4.7Kb时，包装效率显著降低。例如，对于过表达来自cDNA的基因，CMV-poly（A）信号元件约为1KB，因此最大可包装的cDNA长度约为3.2kb，如果共表达GFP（约0.8kb），则可包装的容量大约为2.4kb。
5.哪些血清型的 AAV 可供选择？我该选用哪种AAV呢?
目前为您提供的AAV 血清型为AAV1，AAV2，AAV5，AAV7，AAV6，AAV8 & AAV9。请参阅下面指南中参考文献的建议。
请同时参阅转染效率与不同细胞类型对照表，以确定哪种血清型AAV更适合您的细胞。
6.使用重组腺相关病毒rAAV传递基因的优势是什么?
rAAV病毒滴度很高，可感染分裂和非分裂细胞、免疫原性极小、体内表达外源基因时间长。
7.AAV 载体稳定吗? 如何保存AAV载体 ?
纯化的AAV载体在4℃或更低温度下高度稳定。建议您将AAV分装后，-80℃下长期保存。
