real-time PCR技术的原理及应用
一、实时荧光定量PCR原理
（一）定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。
（二）实时原理
1、常规PCR技术：
对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。
2、实时定量PCR技术：
利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析
3、如何对起始模板定量？
通过Ct值和标准曲线对起始模板进行定量分析.
4、几个概念：
（1）扩增曲线 ：
（2） 荧光阈值：
（3）Ct值：
CT值的重现性：
5、定量原理：
理想的PCR反应： X=X0*2n
非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)n
n：扩增反应的循环次数
X：第n次循环后的产物量
X0：初始模板量
Ex：扩增效率
5、标准曲线
6、绝对定量
1）确定未知样品的 C(t)值
2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量
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