关于分子生物学分型方法的基本介绍
在序列特异性引物（SSP）存在的条件下，用已知的一段DNA与从细胞核提取的DNA混合，通过PCR扩增技术可获得序列特异性寡核苷酸（SSO）。目前HLA-DNA分型均以PCR技术为基础，主要包括：聚合酶链反应寡核苷酸探针杂交（PCR/SSO）、顺序特异引物聚合酶链反应技术（PCR/SSP）、限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR/RFLP）、聚合酶链反应单链构象多态性（PCR/SSCP）、基于序列的HLA分型法（SBT）等，最常用的主要有三种：PCR/SSP、PCR/SSCP、PCR/SSO，此类方法可使HLA分型结果更加迅速、灵敏、精确。
（1）PCR/RFLP分型法：不同的HLA特异性等位基因之间存在一定核苷酸差异，当用相同的限制性核酸内切酶去消化这些特异性等位基因的差异位点时，会得到不同长度和不同数目的DNA片段，经电泳、溴化乙啶染色、紫外照射成像后借助HLA分型程序或手工查表即可确定HLA基因型别。
（2）PCR/SSCP分型法：用PCR扩增特定的靶序列，经变性成为两条单链，然后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳。DNA单链的迁移率取决于其长短和其形成的构象。不同的单链构象不同，若存在碱基差异，会表现为电泳的迁移率不同，根据这个可将不同型的HLA区分开。
（3）PCR/SSO分型法：以位点间或组间特异性引物扩增目的基因，将其扩增产物转移到固相支持体上，利用序列特异性核苷酸探针，通过southern杂交进行扩增片段的分析、鉴定。探针可采用放射性同位素标记或非放射性标记进行相应标记物检测。
（4）PCR/SSP分型法：根据核苷酸碱基序列的多态性和已知的DNA序列，设计各种具有型特异性、组特异性或等位基因特异性的引物。引物的3’-端和5’-碱基可根据多态性序列的不同与其互补。每个型别都有特定的引物相对应。通过特定的PCR反应体系扩增各等位基因的型别特异性DNA片段，产生相对应的特异性扩增产物条带。若为纯合子，产生一条与特异引物相对应的扩增带；若为杂合子，则产生两条与特异引物对应的扩增带。扩增产物仅需借助常规的琼脂糖凝胶电泳，即可根据是否存在特异性产物的电泳条带直接进行HLA基因分型。此为目前临床器官移植配型的常用方法之一。
（5）SBT分型法：用PCR扩增获得大量DNA片段，然后采用测序方法检测扩增片段的碱基序列。该方法是最可靠、最彻底的基因分型方法，它不仅能进行序列识别和分型，更有助于发现新的基因型。
（6）基因芯片：将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于固相载体上，然后与待测的标记过的样本进行核酸分子杂交，通过激光共聚焦荧光检测系统扫描芯片，并对每一个探针上的荧光信号进行检测，从而获得HLA基因表达情况。
