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以毛细管转移方式进行北方转印实验

2019.3.03

 


  要进行北方杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vacuum transfer) 与电转印法 (electroblotting)。 毛细管转移法借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上;要转印完全,起码需要作用6 h以上。 虽然所需花费的时间比较长,以其不须要特别的仪器设备,毛细管转移法目前仍被普遍采用。 若分析RNA时采用变性聚丙烯酰胺胶体电泳,则必须以电转印法进行RNA转印。至于膜的选择,硝基纤维素膜的优点是比较不会产生非专一性反应;不过其一旦被润湿再烘干的后,容易碎裂,不适用于进行多次杂合反应。 尼龙膜的优点是韧性好,与核酸结合的能力也相当强,正可以弥补硝基纤维素膜的缺点,现已成为主流。 一旦将RNA转移至膜上后,即可以利用紫外线照射法 (uvirradiation) 或真空干燥法 (在真空下80℃加热2 h) 将其固定于转印膜上。

 

    仪器用具:塑料盒;玻璃板;裁纸刀

 

    药品试剂:20×SSC (3 M NaCl, 300 mM sodium citrate);尼龙膜;3MM 滤纸;吸水纸;dH2O/DEPC

 

     方法步骤:

    1) 将甲醛洋菜胶体移放在塑料盒内,以dH2O/DEPC冲洗数次,以便去除甲醛。

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