BRAF 基因V600E 突变在肿瘤诊疗中的那些事
背景
鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体（BRAF）基因是RAF 家族的一个重要成员，其编码的蛋白由783 个氨基酸组成，由于第15 外显子的单个碱基发生胸腺嘧啶（T）和腺嘌呤（A）的错义突变，导致翻译蛋白600 位密码子的缬氨酸被谷氨酸取代，产生蛋白序列改变。BRAF 基因V600E 突变对多种肿瘤的发生、发展及预后产生重要影响，如结肠癌、甲状腺乳头状癌、浆液性卵巢癌、恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌等。随着对BRAF 基因V600E 突变研究的深入，可为研究肿瘤发生的复杂机制提供帮助，为肿瘤的诊断、治疗和预后提供新的生物标志物和靶向药物[1]。
BRAF V600E在恶性肿瘤中的研究进展
01
结直肠癌
结直肠癌是第三大常见癌症。RAS-RAF-MEKERK（MAPK）通路的本构性激活在结直肠癌的发生发展中起着重要作用。BRAF是MAPK信号通路上的激酶，在结直肠癌发展中起重要作用。临床观察发现，约8% ~10%的结直肠癌病例中存在BRAF V600E 突变，并预示较低的中位生存率，对结直肠癌的预后有预测价值[2]。
02
甲状腺癌
甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤疾病，主要组织学类型是乳头状癌，约占甲状腺癌的80%，临床特点是恶变程度较低、预后较好。甲状腺癌的发生与多种类型的基因突变有关，其中以BRAF V600E基因突变发生率最高[3]。大样本Meta分析显示甲状腺乳头状癌患者BRAF V600E基因突变率为25%~83%[4]。研究表明，威罗菲尼对25% ~50% 对放射性碘产生耐药的甲状腺乳头状癌患者有效[1]。此外，BRAF 基因V600E 基因突变在乳头状甲状腺癌的诊断中具有重要价值。虽然BRAF 基因V600E 突变与组织学诊断有关，但与其他临床病理特征无关。另外，研究发现：BRAF 基因V600E 突变甲状腺乳头状癌患者具有更高的复发和死亡风险，预后更差[5]。
03
胶质瘤
在胶质瘤中，BRAF V600E 突变主要发生在一组异柠檬酸脱氢酶（IDH）野生型的胶质瘤，包括毛细胞型星形细胞瘤（PA）（12. 5％）、节细胞胶质瘤和间变型节细胞胶质瘤（GG）（50％）、多形性黄色星形细胞瘤（PXA）（约55％）、上皮样胶质母细胞瘤（eGBM）（58％）等[6, 7]。BRAF V600E 突变在WHO I ~ IV 级的多种胶质瘤中均可出现，因此在鉴别诊断中的意义有限，但在一些特定情况下却对病理诊断很有帮助。例如：在低级别的弥漫性胶质瘤（WHOⅡ级）累及大脑皮质时，需要和节细胞胶质瘤（WHOⅠ级）进行鉴别，如果存在BRAF 的突变，则支持后者；PXA（WHOⅡ ~ Ⅲ）或上皮样胶质母细胞瘤和巨细胞胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）都可以出现胞质丰富的上皮样细胞，但巨细胞胶质母细胞瘤通常不具有BRAF 的突变[8]。检测BRAF V600E 突变在预后方面的价值主要体现在儿童胶质瘤中，目前研究者认为BRAFV600E 突变是一种预后相对较差的标志物，比如发生于脑干BRAF V600E 突变的GG（WHOⅠ级）复发率要高于野生型；儿童间脑BRAF V600E 突变的低级别胶质瘤更具侵袭性，尤其是13 岁以下的儿童[9]。对于存在BRAF V600E 突变的胶质瘤进行靶向治疗是目前研究的方向。Kaley 等[10]的研究表明BRAF 抑制剂维罗非尼（Vemurafenib ）对BRAF V600E 突变的胶质瘤患者具有较持久的抗肿瘤活性，但在不同的组织学类型中治疗效果不同，其中以PXA 患者治疗效果最好。此外，也有单独应用BRAF 抑制剂达帕菲尼（Dabrafenib ）成功治疗BRAF V600E突变胶质瘤以及复发性恶性胶质瘤的个案报道[11]。
IHC技术在BRAF V600E检测中应用
目前，BRAF V600E 突变检测平台临床上普遍采用的是直接测序法和Real-time PCR法，这两种方法检测准确性较高，但操作比较复杂，检测周期较长。目前，国内已有医院采用全自动免疫组化方法结合BRAF V600E突变特异性抗体检测了779例肿瘤样本，包括611例结直肠癌，127例甲状腺乳头状癌和41例恶性黑色素瘤。在779例样本中，150例BRAF（V600E）IHC结果阳性，其中38例（611，6%）结直肠癌，102例（127，80%）甲状腺乳头状癌和10例（41，24%）恶性黑色素瘤。与Sanger测序和实时荧光PCR方法比较，BRAF V600E IHC的特异性为99%，敏感性为100%。该项研究的重要意义在于，将全自动IHC 检测BRAF V600E作为一个简单、经济、快速实用的筛选方法，对于推广作为常规病理检测项目的应用提供了详实的临床试验依据，具有很强的临床实际应用价值[12]。
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