液相色谱仪-离子交换色谱实验操作步骤
实验操作
1．填料的预处理
2．装柱
离子交换色谱不同于凝胶色谱，柱子通常较为短小，对于一般工作，通常选长度为10-40cm的柱已足够。柱的直径按照欲分物质的数量来选定。对于很复杂的混合物和进行精细分析是用细长的柱，分辨率较好；对于初步分离可用较粗、容量较大的柱。装好的柱子用起始缓冲液充分平衡后上样。
3．上样
离子交换色谱柱必须充分平衡后方可上样。上样量取决于色谱柱的交换容量，一般为交换容量的70-80%，上样体积可以不受限制。通常低浓度样品上样可达床体积的几倍到几百倍。这一点对较稀的样品极为有利，可以同时起到分离和浓缩的双重作用，可谓一举两得。但用于分析时，为了提高分辨率，上样量体积适当减小。用于离子交换色谱分离的样品溶液的离子强度和pH值必须与起始缓冲液（即流动相A液）一致，如不一致，应进行缓冲液转换，可通过透析或凝胶色谱来完成。
4．洗脱、样品收集
加样后用足够量的起始缓冲液洗涤除去不吸附的物质，然后再进行洗脱。洗脱可选择不同的方法，用控制器或梯度混合器控制梯度。流出的样品组分经紫外检测器实时检测（检测波长一般为280nm），用分部收集器或手工收集。
5．再生
样品洗脱完毕后要进行再生，以除去仍然结合在柱子上未完全洗下的一些蛋白质，通常用100%流动相B液再洗脱1个柱体积即可。
6. 平衡
再生后的柱子欲再次进样需重新进行平衡，平衡一般用100%A液（即0%B液）洗涤柱子至少四个柱体积。
7．保存
柱子不用时应用强洗脱剂洗去结合于柱子上的杂质，然后再用蒸馏水彻底清洗后加抑菌剂保存。
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