离体蛙心脏灌流
实验概要
1.学习蛙离体心脏灌流方法。
2.观察Na 、K 、Ca2 、H 、肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
实验原理
心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na 、K 、Ca2 等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。而改变任氏液的组成成分，离体心脏的活动就会受到影响。
主要试剂
任氏液、1％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、3%乳酸、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱等。
主要设备
蛙类常用手术器械一套、玻璃分针、蛙板、蛙钉、蛙心插管、蛙心夹、试管夹、滴管、试剂瓶、烧杯、双凹夹、万能支架、细线。
实验材料
蛙
实验步骤
1.标本的制备
（1）离体蛙心标本制备（斯氏蛙心插管法） 取蟾蜍一只，打开胸腔，暴露心脏。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用；另一根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。
玻璃分针将心脏向前翻转,在心脏背侧找到静脉窦,在静脉窦以外的地方做一结扎(切忽扎住静脉窦),以阻止血液继续回流心脏（也可不进行此操作）。
左手提起左主动脉上方的结扎线，右手持眼科剪在左主动脉根部（动脉球前端）沿向心方向剪一斜口，将盛有少许任氏液、大小适宜的蛙心插管由此开口处轻轻插入动脉球。当插管尖端到达动脉球基部时，应将插管稍向后退(因主动脉内有螺旋瓣会阻碍插管前进)，并将插管尾端稍向右主动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉球的背部后方及心尖方向推进，在心室收缩时经主动脉瓣进入心室。注意插管不可插得过深，插管的斜面应朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。
若插管中任氏液面随心室的收缩而上下波动，则表明插管进入心室，可将动脉球上已准备好的松结扎紧，并固定于插管侧面的钩上，以免蛙心插管滑出心室。剪断结扎线上方的血管，轻轻提起插管和心脏，在左右肺静脉和前后腔静脉下引一细线并结扎，于结扎线外侧剪去所有相连的组织则得到离体蛙心。此步操作中应注意静脉窦不受损伤并与心脏连结良好。最后，用任氏液反复换洗插管内的任氏液，直到插管中无残留血液为止。此时，离体蛙心标本制备成功，可供实验。
2.实验项目
（1）记录心脏在只有任氏液时心脏的活动情况，并将其作为正常对照。
（2）Na 的作用：用吸管吸出插管中的任氏液后，换以等量的1％氯化钠溶液，观察心脏活动的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。
（3）Ca2 的作用：将1～2滴2％的氯化钙溶液加入灌流液中，观察心脏活动的变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳恢复正常。
（4）K 的作用：将1～2滴1％的氯化钾溶液加入灌流液中，观察心脏活动的变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳恢复正常。
（5）肾上腺素的作用：将1～2滴1：10000肾上腺素加入灌流液中，观察心脏活动的变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳恢复正常。
（6）乙酰胆碱的作用：将1～2滴1：10000乙酰胆碱加入灌流液中，观察心脏活动的变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳恢复正常。
（7）酸的作用：将1～2滴3%的乳酸加入灌流液中，观察心脏活动的变化。有变化出现时应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳恢复正常。
注意事项
1.制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。
2.蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。
3.各种滴管应分开，不可混用。
4. 给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液，否则会造成不可挽回的后果，尤其是K＋，H 稍有过量，即可导致难以恢复的心脏停跳。
5.标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加1～2滴2%CaCl2或1：10000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。
