荧光染色观察药物诱导细胞凋亡
【原理】
Hoechst 33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经 70%
冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10min
内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。
【试剂与器材】
1. Hoechst 33258 贮存液： 称取 Hoechst 33258 试剂 1mg ，用 20ml 蒸馏水溶解后，滤过， 4℃ 避光保存。用时蒸馏水 10 倍稀释成染色液。
2. 封片液（ pH5.5 ）： 20mmol/L 柠檬酸； 50mmol/L 磷酸氢二钠； 50% 甘油， 长春新碱
3. 细胞固定液 甲醇、冰乙醇（ 3∶1 ），现配。
【操作步骤】
1. 将细胞以 4 .0×10 8 /L 密度接种于用 12 孔培养板中，每孔 3 mL ， 37℃ 、 5%CO 2 孵箱中培养
至细胞贴壁，加入长春新碱，使之终浓度分别为 0 、 10 、 100 μg /mL 。继续培养过夜。细胞学涂片或细胞甩片机制备的单细胞片
2. 细胞固定液 4℃ 固定 5min
3. 蒸馏水清洗后，点加 Hoechst 33258 染色液， 10min
4. 蒸馏水洗片后，用滤纸沾去多余液体
5. 封片剂封片后将荧光显微镜下观察并拍照。
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