等电聚焦水平板电泳法的相关介绍
两性电解质在电泳场中形成一个pH梯度,由于蛋白质为两性化合物,其所带的电荷与介质的pH值有关,带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移,当到达其等电点(此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷)时,电流达到最小,不再移动。本法用于检测蛋白类和肽类供试品的等电点。
除另有规定外按以下方法测定。
1. 仪器装置 恒压或恒流电源、带有冷却装置的水平电泳槽和制胶模具。
2. 试剂
(1)水 (电阻率应不低于18MΩ·cm)
(2)A液 称取丙烯酰胺5.0g,亚甲基双丙烯酰胺0.15g,加适量水溶解,并稀释至50ml,双层滤纸滤过,避光保存。
(3)B液 10%过硫酸铵溶液,新鲜配制。
(4)甲基红试液 称取5mg甲基红,溶于10mL 0.05mol/L氢氧化钠中。
(5)50%甘油
(6)正极液 0.5mol/L磷酸溶液
(7)负极液 1mol/L 氢氧化钠溶液
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