等电聚焦水平板电泳法的固定和染色的介绍
一、固定和染色
（1）试剂
a. 固定液 20%三氯醋酸
b. 染色液 i) 染色储备液 称取1.0gG-250，溶于20ml水中，为溶液1；称取125g（NH4）2SO4，溶于400ml水中，为溶液2；称取20g H3PO4，为溶液3；将溶液3加入到溶液1中，待G-250完全溶解后 ，与溶液2混合，并加水至1L，混匀后即得，用前应充分混合。
ii) 工作染色液 取60ml染色储备液，与30ml甲醇混匀，新鲜配制。
c. 脱色液 蒸馏水
（2）固定与染色 电泳完毕后，取出胶片，置于固定液中固定20分钟以上，取出胶片，置染色液中3小时，用脱色液脱色至背景透明后取出晾干，亦可做成干胶永久保存。
二、结果判断
将胶片置凝胶电泳扫描仪中扫描，通过扫描定位法测量蛋白质或多肽与等电点标准的迁移距离。
（1）鉴别 供试品主成分迁移位置应与对照品迁移位置一致。
（2）等电点 以等电点标准试剂中各种蛋白的等电点（pI）对其相应的迁移距离直线回归作图；将供试品的迁移距离代入直线回归方程，求出供试品的等电点。
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