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高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量

2020.3.06

摘要：目的补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量测定的研究。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定，色谱柱为IntetsilODS―3柱，用甲醇-水(48∶52)为流动相，检测波长245 m。结果平均回收率分别为98.5%,RSD为2.8%;98.8%，RSD为2.5%(n =5)。结论方法简单、快捷、精确，可作为补骨脂质量检测方法之一。

关键词：高效液相色谱; 补骨脂; 补骨脂素和异补骨脂素

补骨脂为豆科植物补骨脂(Posralea corylifolia L.)的果实，具温肾助阳，纳气，止泻之功效。收载于《中国药典》2000年版1部，列于《开宝本草》，一名破故纸，谓：“补骨脂生岭南诸州及波斯国。”……李时珍谓[1]：“补骨脂言其功也，胡人呼为婆固脂，而俗讹为破故纸也。”

1 仪器和试药

仪器：Agilent 1100(四元泵)高效液相色谱仪;UV3210紫外分光光度计;试药：甲醇(色谱纯)，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。补骨脂素和异补骨脂素对照品，供含量测定用，由中检所提供。样品：补骨脂药材购于广东清平中药材市场。

2 方法和结果

2.1 紫外吸收波长的研究分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品溶液在200~400 nm波长范围内作光谱扫描，结果补骨脂素和异补骨脂素在245 nm处均有最大吸收，故本含量测定项选择245 nm作为检测波长。

2.2 色谱条件色谱柱：IntesilODS-3柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)，流动相：甲醇水(48：52);流速：0.8 ml/min。检测波长：245 nm;柱温：25℃。补骨脂素和异补骨脂素的tR分别为15.9，18.2 min。

2.3 线性关系考察精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品各12.5 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精确吸取上述对照品溶液1，2，3，4，5 ml分别置于25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液10 μ1进样测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，线性回归方程分别为：补骨脂素Y=382 4X+0.8,r=0.999 7;异补骨脂素Y=429 2X-4.533 4，r=0.999 9;结果表明：补骨脂素和异补骨脂素在进样量0.2~1 μg范围内时呈良好的线性关系。

2.4 对照品溶液和供试品溶液的制备

2.4.1 对照品溶液的制备精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每毫升各含50 μg的混合溶液，即得。

2.4.2 供试品溶液的制备取本品1 g研细，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热提取4 h，放冷，提取液回收至干，残渣加甲醇使溶解，置于10 ml量瓶中，甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.5 精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，计算补骨脂素和异补骨脂素含量。结果表明6次测定结果的平均值分别为1.47，1.72 mg/g，RSD分别为2.5%和2.8%。

2.6 稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，每间隔1 h测定1次，共测定5次，再过24 h测定1次，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性实验对同一批样品6份，依法测定，平均含量分别为1.55 mg/g，RSD 2.4%;1.83 mg/g，RSD 2.6%，结果表明本法的重复性较好。

2.8 回收率实验精密称取已知含量补骨脂药材约1 g ，精密添加补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率，结果平均回收率分别为97.5%，RSD为2.8%;98.8%，RSD为2.5%(n=5)。

2.9 样品测定精密吸取供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，测定补骨脂素和异补骨脂素含量，结果5批平均含量补骨脂素1.32 mg/g，异补骨脂素1.65 mg/g。

3 讨论

补骨脂素和异补骨脂素为香豆素类成分的异构体，在《中国药典》2000年版补骨脂鉴别薄层色谱条件下已能将二者分离，本实验采用高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量具有方法简单、快捷、精确的优点。

参考文献：

[1] 徐国钧.中国药材学[M].北京:中国医药科技出版社,1996:1066.