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多种细胞快速检测的方法(一)

2020.4.08

让小编开始好奇,我的细胞“要怎么判断他们是死是活呢?它们活的好吗?”

我们可以简单将分析细胞活力和增殖测定的方法分成5大类:

1.   代谢增殖测定

2.   DNA合成增殖试验

3.   化学发光细胞活性测定

4.   荧光染料增殖试验

5.   台盼蓝细胞计数

以下简单介绍这些分类的几种常见实验方式吧!(所有图片可点击放大)

代谢增殖测定

MTT检测法

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜(DMSO)溶解沉积在细胞中的甲瓒后,可利用酶标仪490nm波长测光吸收值,依据吸光值(OD值)计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内,吸光值与细胞活性成正比(下图1)。

∆ 图1

XTT检测法

与MTT原理相似,皆是利用添加物与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶反应,并利用酶标仪测定产物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法还原产物是水溶性的橙黄色甲肷,不需经过二甲基亚砜(DMSO)溶解步骤,即可直接测定光吸收值(BI,货号:20-300-1000),操作较MTT方便快速。当XTT与电子耦合剂作用后产生的水溶性甲肷吸光值与活细胞数成正比(下图2)。

∆ 图2

DNA合成增殖试验

BrdU检测法

BrdU为胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期),BrdU可随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性,使部分双股解开成单股才能顺利检测(下图3)。且BrdU为光敏性,因此需要在光线刺激较低(黑暗)的环境下操作,并避光培养。

∆ 图3

EdU检测法

EdU原理跟BrdU检测法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine, T)渗入正在复制的DNA中,并加入能与Edu反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测应用于细胞增殖,或在细胞组织级别作为标记追踪等研究(下图4),实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。

∆ 图4

化学发光细胞活性测定

ATP发光法

ATP是细胞的能量直接来源,ATP发光法是藉由检测细胞内ATP含量来分析细胞增殖。市面上的原理是利用外源的萤火虫荧光素(Luciferin)与荧光素酶(Luciferase),以细胞内含的ATP为能量来源,发生氧化反应产生生物冷光,因此可通过监测冷光光度,来对应ATP含量并判断细胞增殖状况(下图5)。


∆ 图5


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