细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒使用说明
细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
细胞冯库萨（VON KOSSA）染色试剂是一种旨在使用银还原技术，分析固定处理的细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过嗜银染色，钙离子受到强光还原，由金属银沉积取代，呈现黑色。
产品内容
清理液（Reagent A） 250毫升
固着液（Reagent B） 10毫升
染色液（Reagent C） 10毫升
平衡液（Reagent D） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保证6月
用户自备
核固红复染试剂盒（40011）：用于常规染色后复染
60瓦灯：用于还原钙离子
小型染色缸：用于细胞染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
实验步骤
操作一：细胞载玻片染色
样本固着处理
取出待测的细胞载玻片
小心加上200微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
小心加上200微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
室温下，孵育10分钟
小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）
小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗样品表面
小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
重复实验步骤7至8一次
二、样本染色处理
小心加上200微升染色液（Reagent C），铺满整个载玻片样品表面
室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
小心移去载玻片上的染色液（Reagent C）
室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
三、 样本复染处理
小心加上200微升平衡液（Reagent D）在载玻片上，铺满整个载玻片样品表面
室温下孵育5分钟（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色调节作用）
小心移去载玻片上的平衡液（Reagent D）
室温下，小心将载玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟
小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
样本复染处理（核固红）
放上盖玻片或封片
即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
操作二：24孔细胞培养板染色
一、样本固着处理
1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面
5．在室温下孵育10分钟
6．小心抽去固定液（Reagent B）
7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面
8．小心抽去清理液（Reagent A）
9．重复实验步骤7和8两次
二、样本染色处理
小心加上400微升染色液（Reagent C），覆盖整个生长表面
室温下置于太阳光直射或60瓦灯直射孵育60分钟；或直至可见黑色
小心抽去染色液（Reagent C）
室温下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
室温下孵育2分钟
小心抽去清理液（Reagent A）
三、 样本复染处理
小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆盖整个生长表面
室温下孵育5分钟
小心抽去平衡液（Reagent D）
小心加入400微升清理液（Reagent A）
室温下孵育2分钟
小心抽去清理液（Reagent A）
样本复染处理（核固红）
即刻在一般光学显微镜下观察：钙沉积阳性细胞呈现黑色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
注意事项
本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
操作时，须带手套
所有操作在室温下进行
试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
样品染色避免过度，肉眼可见黑色即可终止染色
建议使用核固红复染试剂盒（40011），增强染色对比度
细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定显色清晰
来源：上海一基实业有限公司
联系电话：021-61119791
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