如何从新鲜或冷冻材料提取 DNA
（1）DNA 的粗提
①试剂
a.2倍 CTAB 提取缓冲液：100mmol/L Tris·Cl（pH8.0）,20 mmol/L EDTA，1.4mol/L NaCl，2％CTAB，40mmol/Lβ-巯基乙醇。
b.10％CTAB：10％CTAB，0.7mol/L NaCl。
c.1倍 CTAB 沉淀缓冲液：50mmol/L Tris·Cl（pH8.0），10mmol/L EDTA，1％CTAB，20mmol/Lβ-巯基乙醇。
②操作
a.取1～50g 新鲜植物材料，于液氮中研成粉。
b.将冻粉转入预冷的离心管中，立即加入等体积65℃预热的2倍 CTAB 提取缓冲液充分混匀，65℃保温10～20min，其间不时摇动。
c.加入等体积的氯仿/异戊醇，轻缓颠倒离心管混匀，室温下，12000r/min 离心10～20min。
d.将上清液转入另一离心管中，加入1/10体积的10％CTAB，混匀，加入等体积的氯仿/异戊醇，颠倒离心管混匀，室温、12000r/min离心10min。
e.取上相，重复d操作1次。
f.将上相转入新的经硅烷化处理的离心管中，加入1～1.5倍体积的1倍 CTAB 沉淀缓冲液，混匀，室温下放置30min，观察沉淀生成。如无明显沉淀生成，延长放置时间，随放置时间延长，沉淀量增加。
g.3500～4000r/min 离心5～10min，去上清液，沉淀吹干，备纯化用。
（2）DNA 粗提物的纯化
方法I
①试剂
a.1mol/L 乙酸铵。
b.7.5mol/L 乙酸铵。
②操作
a.按 0.5mL/g 材料的比例加入1mol/L 乙酸铵溶液，使沉淀溶解完全，再加入7.5mol/L 乙酸铵至终浓度为2.5mol/L。
b.加入2倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10min。
c.用细玻璃棒缠出 DNA 纤维，或10000min 离心5min，弃去上清液。
d.用70％乙醇漂洗沉淀，吹干，沉淀溶于适量TE。
e.加入1μL 1mg/mL RNase，于4℃放置，备用。
方法Ⅱ
①试剂
a.CsCl 梯度溶液：取 TE 缓冲液（pH8.0）25mL，加入CsCl 25g，溶解后按 5mg/mL 比例加入 EB。
b.异丙醇溶液：向任意量的异丙醇中加TE缓冲液至两相出现，搅拌状态下缓慢加入固体CsCl 至下相（TE 相）中出现白色沉淀，将两相混匀。
②操作
a.向粗提的 DNA 沉淀加入适量 CsCl 梯度溶液，置50℃水浴中轻搅溶解。
b.将溶解好的梯度液转入超速离心管中严格平衡，封管，20℃、50000离心力离心过夜。
c.取出离心管，置紫外灯下观察 DNA 条带，穿刺取出，转至另一离心管中。
d.加入等体积的异丙醇溶液，轻缓混匀，静置至分层，去上层。
e.重复 d 抽提数次，至紫红色消失。
f.去除 EB 的下相中加入2倍体积的 TE 缓冲液稀释，混匀，加入2倍体积的异丙醇，混匀，室温下放置10min。
g.12000离心力离心10min，沉淀溶于适量TE缓冲液中。
