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单克隆酶联免疫分析筛选方法检测大肠杆菌O157:H7的介绍

2023.1.16

  该方法是对所有食品E.coliO157:H7的存在进行筛选,不是确证试验,因为试验中所用的单克隆抗体可能与少部分的非E.coliO157:H7有交叉反应。

  阳性的检疫结果应是客观的,必须配有450nm滤光片的光度计来进行测试。只有当阴性和阳性对照均有可接受的光密度读数时,阳性结果才是有效的。

  原理E.coliO157:H7原的检测是基于用特异性单克隆抗体进行的酶免疫分析(EIA)。用抗E.coliO157:H7抗原的单克隆抗体包被于聚苯乙烯微量小孔的内表面,将样品和对照加入小孔中。样品中如有E.coliO157:H7抗原存在,则将被吸附在孔上的特异性抗体吸收。冲洗后,加入结合剂与被抗体吸收的E.coliO157:H7抗原结合。再冲洗小孔,除去未结合的结合剂,然后再加入酶底物。当用终止液终止反应时,出现的蓝色则转变为黄色。样品中是否有E.coliO157:H7抗原取决于颜色产生的光密度。

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