目标蛋白(target proteins)粗提方法-2
4）去垢剂
去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。
A．中性去垢剂
又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal
CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。中性去垢剂作用后可通过Sephadex
LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白，不必先除去去垢剂。
B．阴离子去垢剂 常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。前者可促进核蛋白的溶解，将核酸释放出来，并对核酸酶有一定抑制作用，常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂 如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂 又称为生物表面活性剂，包括种类较为广泛，如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂 在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
5)变性剂
蛋白质变性剂的作用是破坏蛋白质的次级键，如氢键、盐键和疏水力，引起天然构象的解体；它们并不破坏共价键，如肽键和二硫键，故不涉及一级结构的改变。变性剂有溶解型和沉淀型两类，SDS、尿素和胍盐是有效的溶解型变性剂，而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/异戊醇是有效的沉淀变性剂。一般而言，变性剂应用时常大大过量，破坏氢键的变性剂用量至少两倍于氨基酸的克分子数，如1克蛋白质可可结合1.4g。SDS溶于水可达25%，对温度敏感，W/V贮存液最为方便。需要注意的是SDS的钾盐是不溶性的，所以SDS溶液中要避免混入钾盐。尿素极易溶于水，可达10mol/L,在8mol/L以上要注意温度以防止沉淀。尿素在水中缓慢分解形成氨及高度活性的氰酸离子，故要防止高温。三氯乙酸与过氯酸（TCA，PCA）都是极好的沉淀剂，能沉淀蛋白质和核酸，前者应用更为广泛。
第二节 提取方法
一．固液萃取
在固液萃取中，提取物是由固相转为液相，或由细胞内转为细胞外，其提取效率与物质的扩散作用有关。
为了增加扩散物质的量，也就是提高提取速度，常采用如下措施：
1）提高材料的破碎程度，以增加扩散面积，减少扩散距离；
2）进行搅拌，使已扩散的溶质迅速与溶剂混匀，以保持两项界面最大浓度差，或分多次提取，不断更换新鲜溶剂，以提高扩散速率；
3）延长提取时间，提高提取温度，以及减少溶液粘度（如属大分子核酸干扰，加入少量鱼精蛋白或硫酸链霉素沉淀除去）等。
实际上从破碎后的固体细胞提取所需组分，当细胞破碎程度及提取温度受到限制时，采用少量多次提取方法较为有利。
二．液液萃取
液液萃取选用的溶剂必须与被抽提的溶液互不混合、且对被抽提的溶质有选择性的溶解能力。最常用的液液萃取溶剂为二相溶剂，水或水-醇为一相，与水互不相溶的各种碳氢化合物，如低级醚、酯、苯酚等，为另外一相。
第三节 蛋白质和酶的提取分离
一．蛋白质及其溶解性质
蛋白质有多种分类方法：
1）按其功能 活性蛋白和非活性蛋白
2）按其结构 简单蛋白和结合蛋白
3）按其溶解度 水溶性蛋白、醇溶蛋白、硬蛋白（不溶于水、稀酸、稀碱和有机溶剂，遇强酸或强碱溶解）。一般来说，大部分蛋白可溶于水、稀酸、稀碱或稀盐溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂。
二．蛋白质的一般提取方法
1． 水溶液提取
凡能溶于水、稀盐、稀酸或稀碱的蛋白质，一般可用稀盐或缓冲溶液进行提取，稀盐溶液和缓冲溶液，有利于稳定蛋白结构和增加蛋白质溶解度。
此时应考虑以下因素：
1）提取液体积 加入量太少则提取不完全，加的过多则不利于浓缩，一般为原材料的3-6倍的体积，可一次或分次提取。
2）盐浓度
一般在0.02-0.2M的范围内，常用的稀盐和缓冲液有0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、0.09-0.15M的氯化钠等。在某些情况下，也用到较高的盐浓度，如提取脱氧核糖蛋白及膜蛋白。有时为了螯合某些金属离子和解离酶分子与其它分子的静电结合，选用柠檬酸缓冲系统和焦磷酸缓冲液可获得较好效果。
