RNase A/Tl保护和 RNase H 聚焦法实验
RNase保护法
RNase H 聚焦法
实验方法原理 | RNA与互补的 [ 32P ] 标记的探针在溶液中复件后形成的 RNA-RNA 杂合分子对单链专一的 RNase 具有抗性。此法可以对 RNA 分子末端进行定位或对含内含子的交界定位。与 Northern blot 相比,它是一种十分有效而且灵敏度很高的并可用于测定 mRNA 丰度的方法。杂交过程中加入过量的探针能使所有互补序列形成标记的杂合分子。未杂交探引和已杂交探针的单链部分则被消化而清除。“被保护的”探针通过变性的聚丙烯酰胺凝胶来检测并定量。最初是用 DNA 单链作为探针,但是单链 DNA 的制备耗时多。又因为标记 RNA非常容易,所以根据 RNA-RNA 杂交进行测定十分有利。 |
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实验材料 | 胰RNase RNase T1 蛋白酶K |
试剂、试剂盒 | 杂交混合液 RNase消化缓冲液 |
仪器、耗材 | 水浴 垂直电泳装置 暗片盒 X射线片 探针 |
实验步骤 |
一、材料与设备 展开 |