大豆源性成分核酸检测试剂盒使用说明
说明
物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂，可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于食品及其原料中过敏原大豆成分的检测，检出限为0.01%。
◆ 产品组成（96测试）
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022062LⅡ |
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试剂 |
含量 |
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A-大豆源-P |
20μL × 8管× 12排 |
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NG-P |
100μL × 3支 |
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PG-大豆源-P |
100μL × 2支 |
适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600等实时荧光PCR仪。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴。
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆样品处理
参照《SN/T 1961.19-2013 出口食品过敏原成分检测 第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。
称取300mg已制备好的样品提取DNA。
样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤，防止交叉污染的措施按照GB/T 27403中的规定执行。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
1.模板制备（样本制备区）
建议使用配套动物基因组DNA提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。
2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管，放置在室温待解冻后，离心30秒后揭开封口膜，向每管反应液中分别加入5μL模板，顺序为NG、待测样品模板、PG-大豆源-P。盖好配套的PCR管盖后，涡旋混匀30s，离心1min，立即进行PCR扩增反应。
3.扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量PCR仪，荧光基团选择FAM，淬灭基团选择TAMRA。
按下列条件设置扩增反应：
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PCR循环 |
荧光收集位点 |
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50℃ |
2分钟 |
1个循环 |
— |
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95℃ |
10分钟 |
1个循环 |
— |
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95℃ |
15秒 |
40个循环 |
— |
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60℃ |
1分钟 |
※ |
4.基线和阈值设定
基线调整取3-15个循环的荧光信号，阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点。
◆ 结果判定
检测样品Ct值≤35，则判定为被检样品阳性，检出过敏原大豆成分。
检测样品Ct值＝40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原大豆成分。
检测样品35＜Ct值＜40，则重复一次。如再次扩增后Ct值仍为＜40，则判定为被检样品阳性，检出过敏原大豆成分。如再次扩增后Ct值＝40，则判定为被检样品阴性，未检出过敏原大豆成分。
NG反应为平滑直线，PG反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。
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焦点事件
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项目成果
