虾源性成分核酸检测试剂盒使用说明
说明
物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂，可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于食品及其原料中过敏原虾成分的检测，可于一个反应中同时检测虾与北极虾，检出限为0.01%。（需注意：FAM通道的检测引物为虾的检测引物，对海蟹、虾/蟹爬、虎头蟹、赤甲蟹有非特异性扩增。VIC通道的为北极虾的检测引物。）
◆ 产品组成（96测试）
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021132LⅡ |
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试剂 |
含量 |
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A-虾源-P |
20μL × 8管× 12排 |
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NG-P |
100μL × 3支 |
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PG-虾源-P |
100μL × 2支 |
适用仪器
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600等实时荧光PCR仪。（可同时检测FAM通道（494 nm）、VIC通道（538nm）两种通道的荧光定量PCR仪）。
◆ 自备耗材和仪器
①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属浴。
◆ 注意事项
1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。
1）第一区：样本制备区。
2）第二区：模板添加区。
3）第三区：扩增及产物分析区。
分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。
2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。
3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心30秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。
5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。
6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。
◆样品处理
参照《SN/T 1961.10-2013 出口食品过敏原成分检测 第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。
样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤，防止交叉污染的措施按照GB/T 27403中的规定执行。
详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。
◆ 实验操作
1.模板制备（样本制备区）
建议使用配套动物基因组DNA提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。
2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）
剪下所需测试数的已含有反应液的PCR管，放置在室温待解冻后，离心30秒后揭开封口膜，向每管反应液中分别加入5μL模板，顺序为NG、待测样品模板、PG-虾源-P。盖好配套的PCR管盖后，涡旋混匀30s，离心1min，立即进行PCR扩增反应。
3.扩增反应（扩增及产物分析区）
使用荧光定量PCR仪，使用FAM和VIC通道。
按下列条件设置扩增反应：
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PCR循环 |
荧光收集位点 |
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95℃ |
30秒 |
1个循环 |
— |
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95℃ |
15秒 |
45个循环 |
— |
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60℃ |
40秒 |
※ |
4.基线和阈值设定
基线调整取3-15个循环的荧光信号，阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点，且Ct值不出现任何数值为准。
◆结果判定
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常，检测样品FAM与VIC通道均无荧光增幅现象，判断样品中未检出致敏原虾成分。
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常，检测样品有明显的荧光增幅曲线，且Ct值≤35，判断样品中检出致敏原虾成分。
同时进行的阴性、阳性、空白对照实验结果正常，若检测样品荧光增幅曲线的Ct值在35-40之间，则应重新进行实时荧光PCR反应。再次扩增后的结果Ct值仍在35-40之间，可判断样品中检出致敏原虾成分，否则可判断样品中未检出过敏原虾成分。
FAM与VIC通道其中有一个检测结果为阳性，即可判断该样品中检出致敏原虾成分。
NG反应为平滑直线，PG反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。
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焦点事件
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项目成果
