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染色质免疫共沉淀研究

2020.6.09

真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比,染色质免疫沉淀技术(ChIP)能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。

染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)作为最佳的研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法,它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

CHIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且,CHIP与其他方法的结合,扩大了其应用范围:CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选;CHIP与体内足迹法相结合,用于寻找反式因子的体内结合位点;RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。由此可见,随着CHIP的进一步完善,它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。

作为表观遗传学的专业解决方案供应商,艾美捷向您推荐Epigentek品牌的最热销的常规的染色质免疫试剂盒和最有特色的植物ChIP试剂盒。另外,除了成套的试剂盒外,艾美捷同样能为您提供与ChIP试剂盒相关的ChIP级抗体,可广泛用于包括ChIP、IHC、IF等在内的多种实验应用。

性价比最高的组织染色质免疫共沉淀试剂盒(ChIP)(p-2002)提供了对细胞样品进行染色质免疫沉淀反应所需的所有试剂。并且本试剂盒中含有一种阳性对照抗体(RNA聚合酶II抗体)、一种阴性对照抗体(正常小鼠的IgG)、GAPDH引物(可以作为阳性对照来保证试剂盒中试剂和操作步骤没出现问题)。在大多数生长期的哺乳动物细胞中,RNA聚合酶II会在GAPDH基因启动子上富集,准备起始转录,因此该启动子能与RNA聚合酶II发生免疫沉淀反应,而不能与正常小鼠IgG发生。在本染色质免疫沉淀反应中,细胞耦合了甲醛,提取出其中的染色质。染色质进行适当的打断,然后加入到微孔中与其表面上吸附的抗体发生免疫反应。特异性结合到微孔上的DNA从抗体-捕获蛋白-DNA复合物上释放出来,翻转后,通过本公司专门设计的高速离心柱纯化。洗脱下来的DNA可直接用于随后的各种分析。本试剂盒是基于96孔板的,市场上同类产品中最快捷的试剂盒,对CHIP过程进行了彻底的简化,操作简捷,方便易学整个处理过程不到5小时,同时可拆卸式的96孔板模式使研究人员能根据自己需要选择手工或是高通量分析。

ChIP试剂盒—染色质免疫共沉淀研究完整方案ChIP试剂盒—染色质免疫共沉淀研究完整方案

(左图为ChIP试剂盒(p-2002)简单便捷的实验流程)(右图为ChIP试剂盒(p-2002)卓越性能)


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