氨基酸代谢标记实验_辅助方案 TCA沉淀测定标记掺入量
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 加 10～20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1 ml 0.1％（m/V）BSA/0.02％（m/V）NaN3 中，置于冰上。 2. 加 1 ml 冷冻的 10％（m/V）TCA 溶液。剧烈振荡混匀，在冰上孵育 30 min。 3. 在真空滤过装置内，滤过细胞悬液到 2.5 cm 玻璃微纤维滤膜上。 4. 用 5ml 冷冻 10％TCA 溶液洗膜 2 次，再用乙醇洗 2 次。空气干燥 30 min。 5. 在玻璃微纤维滤膜上点同样体积（见步骤 1，10～20 μl）的放射性标记的细胞悬液，在空气中干燥。 6. 转移滤膜到 20 ml 闪烁管里，加 5 ml 闪烁记数溶液，用闪烁记数仪测定放射活性。 7. 计算 TCA 沉淀标记（见步骤 4）与总放射活性的比值（见步骤 5）。 展开 |
| 注意事项 | １. TCA 有强烈腐蚀性。在制备和操作 TCA 溶液时注意保护眼睛并避免皮肤接触。 2. 洗液应按照混合化学/放射性废弃物处理。根据安全规程进行处理。 |
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