关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

分配色谱是什么?

2020.6.02

  以流动相为气体、液体不同,可以区分为气相色谱(GC)、液相色谱(LC)。高效液相色谱(HPLC)与液相色谱(LC)的区别:高效液相色谱(HPLC)以经典的气相色谱法和液相色谱法为基础,发展起来的分离分析技术。

1.jpg

  经典的液相色谱(LC):使用粗粒多孔固定相,装填在大口径、长玻璃柱管内,流动相仅靠重力流经色谱柱,溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢,柱入口压力低,仅有低柱效,分析时间冗长。

  高效液相色谱(HPLC):使用了全多孔微粒固定相,装填在小口径、短不锈钢柱内,流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱,溶质在固定相的传质,扩散速度大大加快,从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。

  高效液相色谱(HPLC)中,按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类为:

  吸附色谱(Adsorption Chrommatography):固体为吸附剂,不同极性液体为流动相,依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离,主要体现为:薄层色谱和柱色谱。

  分配色谱(Partitiion Chromatography):用载带在固相基体上的固定液作固定相,以不同极性溶剂作流动相,依据样品中各组分在固定液上分配性能的差别来实现分离,色谱仪器主要体现为:液-液分配色谱仪(LLPC)。

  离子色谱(Ion Chromatography):用高效微粒离子交换剂作固定相,以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相,依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离,色谱仪器:离子交换色谱仪。

  体积排阻色谱(Size Exclusion Chhromatography):用化学惰性的多孔性凝胶作固定相,按固定相对样品中各组分分子体积阻滞作用的差别来实现分离。其中,以水溶液作流动相的体积排阻色谱法,称为凝胶过滤色谱(GFC:Gel Filtration Chromatography);以有机溶剂作流动相的体积排阻色谱法,称为凝胶渗透色谱法(GPC:Gel Filtration Chromatography)。

  亲和色谱(Affinity Chromatography): 以在不同基体上,键合多种不同特性的配位体作固定相,用具有不同pH值的缓冲溶液作流动相,依据生物分子(氨基酸、肽、蛋白质、核碱、核苷、核苷酸、核酸、酶等)与基体上键联的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别,而实现对具有生物活性的生物分子的分离。

  可根据样品的相对分子质量、溶解度以及化学构造等,对所需要的色谱仪器进行筛选:

  相对分子质量:相对分子质量小于200,挥发性好,沸点低于 400℃,加热易气化,易挥发但受热不易分解变质的物质,可用气相色谱仪(GC);相对分子质量在200~2000的化合物,可用液-液分配色谱仪、液-固吸附色谱仪和离子交换色谱仪剖析。相对分子质量大于2000的化合物,可用凝胶色谱仪(GPC)剖析。

  溶解度:水溶性样品最好用离子交换色谱仪和液-液分配色谱仪剖析。微溶于水,但用酸或碱能很好电离的化合物,可用离子交换色谱仪剖析。油溶性和非极性的样品,可用液固吸附色谱仪剖析。

  化学构造:样品中含有离子型或可离子化的化合物,或者能与离子型化合物相互作用的化合物(如,配位体和有机螯合剂),可首要考虑用离子交换色谱仪剖析,但液-液分配色谱仪和凝胶色谱仪也能剖析。具有不同官能团的化合物、同系物,可用液-液分配色谱仪剖析。异构体可用液固吸附色谱仪剖析。高分子聚合物可用凝胶色谱仪剖析。


推荐
关闭