PCR仪为什么得不到RACE产物？
*加入Hela对照
*低质量的RNA模板
*逆转录失败，SSII和SSIII非常适用于长模板cDNA的合成
*目的基因丰度太低，可以通过提高PCR的循环次数来解决，建议使用巢式PCR
*目的基因没有表达，可以通过使用两条GSPs来分析cDNA中是否含有目的基因
*目的基因太长而不适合进行反转录，建议使用GeneRacer试剂盒中的Oligo dT来得到全长cDNA，使用随机引物或与模板的5’端尽可能近的GSP进行PCR。
*cDNA模板属于困难模板，可以通过以下方法解决：优化PCR反应参数及反应体系；降低退火温度；使用5-10％的DMSO帮助通过高GC含量区；使用高保真度和高延伸能力的酶进行PCR反应。
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