关于细胞分裂指数的测定方法介绍
分裂指数测定可用盖片培养法,亦可直接在小平皿中进行。在计算分裂相时要掌握好分裂相标准,选择密度近似区观察计数。
一、原理
体外培养细胞生长、分裂繁殖的本领,可用分裂指数来显示.它与生长曲线有一定的联系,如跟着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期.
分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比,它是测定细胞周期的一个主要指标,也是不同实验研究选择细胞的主要依据.
二、仪器、用品与试剂
1、仪器与用品：CO2培养箱、普通显微镜、细胞培养皿、盖玻片、吸管
2、试剂：培养液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液
三、操作步骤
1、消化细胞,将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中.
2、CO2培养箱中培养48小时,使细胞长在盖片上.
3、取出盖片,按下列顺序操作：
PBS漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3：1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗.
4、盖片晾干后反扣在载玻片上,镜检.
5、计算:
分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%
四、注意事项
操作时动作要轻,以免使盖片上的细胞脱落.
附：Giemsa染液配制：
称Giemsa粉末0.5克,加几滴甘油研磨,再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml）.56℃中保温90—120分钟.加入33ml甲醇,置棕色瓶中保存,此为Giemsa原液.
使用时按要求用PBS稀释.一般稀释10倍.
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