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一、材料
1. 缓冲液和溶液
乙酸铵（10 mol/L)
EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 )
乙醇
2. 酶和缓冲液
T4 噬菌体多核苷酸激酶
10X T4 噬菌体多核苷酸激酶缓冲液
3. 核酸和寡核苷酸
DNA (10~50 pmol)
4. 放射性复合物
[γ-32P] ATP ( 10 mCi/ml，比活性为 3000~7000 Ci/mmol）
5. 专用设备
液体闪烁计数仪，可通过契仑科夫辐射测量 32P
Sephadex G-50 离心柱，用 TE ( pH 7.6) 平衡
或
Sephadex G-50 柱（1 ml)，用 TE ( pH 7.6) 平衡
二、方法
1. 在一个微量离心管中混合下列试剂：
去磷酸化的 DNA 10~50 pmol
10X T4 噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 5 μl
10 mCi/ml [γ-32P] ATP
( 比活性为 3000~7000 Ci/mmol) 50 pmol
T4 噬菌体多核苷酸激酶 10 单位
水 加至 50 μl
37℃ 温育反应 1 h。
2. 加入 2 μl 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 以终止反应。用液体闪烁计数仪中的契仑科夫计数测量反应混合物中的总放射性。
3. 通过以下任一方法分离放射性标记探针与未掺入的 dNTP：
用 Sephadex G-50 离心柱层析
或
用 1 ml Sephadex G-50 柱（用 TE 平衡）常规尺寸排阻层析
或
用乙酸铵和乙醇对放射性标记的 DNA 进行两轮选择性沉淀
4. 通过契仑科夫计数测定探针制品中的放射性量，用探针中放射性含量除以反应混合物中的放射性总量来计算放射性标记物转移到 5' 端的效率。
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