SPE-HPLC测定饲料中5种磺胺类药物
方案优势
采用SPE-HPLC-UV 测定饲料中磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉5种磺胺类药物的方法，简单快速，准确。
采用标准
国家相关标准
方法/原理/步骤
1.样品制备
饲料，打碎。
2.样品提取
称取混合饲料样品2 g，置于具塞锥形瓶中，加入50 mL的乙腈于振荡器振荡提取30 min，过滤，滤液备用。
3.样品SPE净化
准确吸取试液混合饲料2 mL，移入用10 mL乙腈淋洗过的碱性氧化铝小柱中，令其自然流速流出。待试液全部流出后吹干，用2次2 mL流动相洗脱，收集洗脱液，并过0.45μm的滤膜，滤液上HPLC测定。
仪器设备
仪器与试剂
仪器：四元低压LabTech-HPLC；色谱柱：LabTechC18 4.6 mm×25 cm；LabTech旋转蒸发仪；Win-12手动固相萃取仪。
试剂：冰乙酸，优先级；甲醇，色谱纯；乙腈，色谱纯；所用水均为超纯水。
流动相：在1 000 mL容量瓶中加入750 mL去离子水，移取冰乙酸3 mL加入水中，与250 mL乙腈混合，摇匀，过0.45μm滤膜，脱气，备用。
磺胺类药物标准溶液浓度20μ/mL：磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉。
固相萃取柱：碱性氧化铝固相萃取柱，500 mg/3 mL。
HPLC色谱条件
流动相：乙腈:水(25:75)；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长为270 nm；进样量：20μL；柱温：40℃。
结果与结论
磺胺类药物的HPLC色谱图
将5种磺胺类药物混标进HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉浓度均是4mg/mL。结果如图所示：见图1。
图1 5种磺胺类药物的HPLC色谱图
重复性实验
将5种磺胺类药物混标进HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉浓度均是2mg/mL，重复进样，重叠色谱图如下图所示，并且计算出峰时间重复性RSD均小于5%，见表1。
1.磺胺嘧啶；2.磺胺间甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲恶唑；5.磺胺喹恶啉
图2 5种标品的重叠色谱图
表1 5种标品的重复性及RSD%
磺胺嘧啶 4.558 4.557 4.540 4.553 4.553 0.158
磺胺间甲氧嘧啶 6.377 6.373 6.360 6.377 6.377 0.116
磺胺二甲基嘧啶 7.597 7.590 7.573 7.587 7.582 0.118
磺胺甲恶唑 10.453 10.440 10.408 10.433 10.420 0.167
磺胺喹恶啉 16.950 16.935 16.895 16.917 16.893 0.147
饲料样品的空白色谱图和加标色谱图
饲料空白样品和加标样品经过提取，并通过小柱净化后，得到的色谱图见图3和图4.。
图3饲料样品空白的色谱图
1.磺胺嘧啶；2.磺胺间甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲恶唑；5.磺胺喹恶啉
图4饲料样品加标的色谱图(1 mg/kg)
饲料样品过SPE净化的回收率及RSD
采用加标样品(加标浓度磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶;磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉均为1 mg/mL)，经提取、SPE净化处理，并用HPLC分析，计算加标回收率及相对标准偏差，5种磺胺类药物的回收率均在82.65%~105.70%之间，RSD均小于10%(表2)。表2
饲料样品中加标过SPE5种磺胺类药物的回收率及RSD(n = 5)
峰序 保留时间(min) SPE-1 SPE-2 SPE-3 SPE-4 SPE-5 平均值 RSD%
磺胺嘧啶 4.558 102.04 94.62 91.92 85.79 94.77 93.83 6.24
磺胺间甲氧嘧啶 6.377 108.14 99.90 98.39 91.99 100.78 99.84 5.79
磺胺二甲基嘧啶 7.597 108.46 102.18 106.25 107.78 103.85 105.70 2.51
磺胺甲恶唑 10.453 94.46 83.06 86.91 76.719 78.97 84.02 8.35
磺胺喹恶啉 16.950 93.22 85.57 80.65 76.54 77.28 82.65 8.35
结论
本方法对饲料样品提取，并采用手动的Win-12SPE净化，采用HPLC检测其中的5种磺胺类药物，5种磺胺类药物的回收率均在82.65%~105.70%之间，RSD均小于10%。实验过程操作简单，结果显示数据理想，可用于常规的饲料中磺胺类药物的检测。
