利用现有技术，如何鉴定一个全新的病毒-2
wuguojun680510网友的观点是：单纯凭分子生物学技术鉴定一个新的病毒是不可能的，只能得知可能是一个新病毒，鉴定一种新病毒还必需从经典途径走起。
1、纯化病毒。
2、大小、形态鉴定。
3、对称形式确定
4、核酸类型确定
5、细胞嗜性鉴定
6、分子生物学及生物信息学技术等
gengqingmao网友说：我刚学，不大懂！
1、首先你要确认疾病主要是由病毒引起的；
2、分离病毒，对于一个全新的病毒来讲，由于其培养特性及基因序列不知，本步骤是最难的。我认为首先可以充分利用临床病例，找出病毒集聚部位，利用动物实验进行感染，从相应部位分离滤菌液，然后进行培养，观察；
3、对于没有明显CPE的病毒，我们也可以利用培养细胞的代谢变化（如PH值）来确定病毒感染。
认识很浅显，并且没有实践经验，希望各位批评指正！谢谢！
hty333网友的观点是：
1、要确认疾病主要是由病毒引起的；
2、纯化病毒和形态鉴定；
3、病毒核酸基因的分子生物学及生物信息学鉴定
4、病毒的临床病理基理认证。
yangernan网友的观点是：根据症状判断是那类的病毒。然后提取病毒，做RT-PCR或PCR，争取把病毒整个基因组扩增出来，然后进行序列比对，功能基因组研究等。难就难在RT-PCR或PCR，引物的设计很难，不过多试验可能能成功。
phq629网友的观点是：大家好像对基因测序基于厚望，可能是我们接触的多、成本低，易做之故吧，但关键是病毒离不开细胞，所以如何保证随机扩增或鸟枪法获得的片断是未知病原的核酸，再者朊粒这类病原的存在，使该法存在一定的误区。最终还要回归经典方法。
1、发现新病原肯定是由发病开始，所以与现有病原的临症、病理变化、流行病学等鉴别诊断是发现的关键；
2、提取病料做回归试验看能否复制病例，确定为有病原（人最好有相对通用的动物模型）；
3、通过体外培养、滤过性、染色显微镜观察等初步区分细菌或病毒；
4、如疑为病毒可通过CPE、电镜、保护力试验、组织细胞嗜性结合临症、病理变化、流行病学、生理生化指标等综合分析初步对病毒分类，其中相对纯培养物的电镜结果是病毒的铁的证据，组织、血液病料结果受个人经验影响甚大，故纯化病毒是关键，也是后续新方法的基石；
5、进一步展开大量生物学、分子生物学研究，全基因序列的确定是最终分类定位的最重要依据。
对于基因芯片我觉得还是很有前途，但可能有朊粒的误区，2D电泳我觉得先得纯化病毒，再者需要很全的2D图谱，以后再细菌诊断上可能更适合。
以上是我的拙见，一位尚外找到工作的小硕在此献丑，还望不吝赐教！
swzheng网友的观点是：
1、选用各种细胞系培养，有CPE就好办；
2、大量培养病毒；
3、超离、纯化病毒；
4、纯化的病毒提取核酸（RNA/DNA），随机引物进行PCR；
5、电泳切500bp左右的PCR产物，纯化，克隆到T载体上；
6、大量的质粒测序（大海捞针，老外是用96孔板来做）；
7、所测序列做Blast；能否成功就看你运气了。
alang820216网友说：我觉得，最难就在病毒的分离，培养上。全新的病毒，只要我们有，应该通过一系列的方法是可以鉴定的。柯赫氏法则，分子生物学方法都要用！
贰拾面体网友说我们是这样做的：
1、分离病毒：用96孔板接种多种细胞，将临床标本接种到细胞生长，分离病毒。虽然接种了多种细胞，也定会有漏网的雨。而且漏掉的还可能比没有漏掉的更有意义；
2、透射电镜：尽管细胞出的CPE很好，也不一定能观察到病毒颗粒。我们曾经在一份标本的细胞培养物中的一个细胞浆中、一个视野里，同事捕获到大小不同的2个病毒颗粒；
3、随机PCR：我们用细胞培养病毒提出RNA（根据电镜认为是RNA病毒），逆转录，P出若干个片段，连接T载体，测序、比对获得了2段病毒的序列；
4、根据病毒序列，设计相对稳定区序列引物，测序......通过信息学，测绘其系统发生树......
目前我们已经分离到接近9种病毒，鉴定出6株为已知的。呵呵，多数为已知的啊。
jiasheng1999网友的观点是：看了以上关于如何鉴定新病毒意见，自己也是从事病毒研究的。对病毒还有一点了解。于是也有点感想!
1、发现新病毒最先是从其表型认识开始的。病毒的一个重要表型就是疾病(人们关心的较多)；
2、如果病毒的表型很特殊(其实没有如果之说，因为表型总会有不同的，之所以发现不了是因为现有的手段不够或没被关注)，人们人容易想到它是一种新的。可能是一种全新的病毒，也可能是已有的变易株出现；
3、分离这种新病毒(很关键) 。从唯物论说新病毒也要有物质性，要客观存在。当然说分离不到新病毒，并不一定说它不存在。但这是后续工作的基础；
4、利用"科赫法则"，证明病毒的表性和病毒存在的正相关(可以说是因果关系)；
5、排除他不是现有的病原。从病毒形态学特征-培养特性-血清学分析-分子生物学鉴定等；
6、新病毒的分类学位置。首先确定新病毒属于哪个亚类:真病毒(核酸和蛋白)\类病毒(只有核酸)\朊病毒(只有蛋白质)，如果是真病毒要做以下工作:有无囊膜\核酸类型\核衣壳对称形式等；
7、此外当科技飞速发展出现了一些新技术，如芯片技术\2D蛋白电泳等都是很好的工具。但是没有一种技术是完美的。所以不能简单认为所用技术越先进，得出的结果就越可信。传统看似简单的技术仍是鉴定新病毒的有力工具；
8、鉴定新病毒的另个难点。病毒的表型不仅仅由基因组的一级序列或者是蛋白一级结构(朊病毒)决定。利用反向遗传操作技术，可以拯救出与原病毒基因组序列完全一致的病毒，但他们的表型却有差异。这就说明病毒的表型部分由基因组序列以外的东西决定(可能受宿主的某些成分影响)。对于朊病毒来说，病毒的"遗传物质"是正常机体"变坏"的蛋白，他与正常的蛋白在一级结构上(氨基酸序列)没有任何差别，而在高级结构上有差异。这种差异用现有依赖蛋白一级序列的技术根本无法区别。总之鉴定一种新的病毒不是一件容易的事啊!
fanjake网友的观点是：
1、首先我们要明确鉴定病毒的目的，如想明确病因等；
2、鉴定病毒的主要困难在于如何分离和纯化病毒；
3、接着按照病毒的理化特征来鉴定病毒；
如果想把传统电镜技术创新一下，对观察病毒形态可不可能容易一点;比如免疫电镜就是个例子;那还有其他的吗?
贰拾面体网友的观点是：
1、用多种细胞（6～8种）同时做病毒分离。
2、出现CPE者传代
3、电镜
4、根据电镜形态推测病毒种属，设计通用引物做PCR
5、PCR失败后，用随机PCR
6、病毒与疾病的相关性研究：双份血清难得，我们做了患者血清与同时期的一般发热血清、一般呼吸道感染患者血清、正常儿童健康查体血清和健康成人血清做了对比分析。
xiaochunwang网友的观点是：
1、理化特征。利用电子显微镜观察病毒的大小和形态；利用电泳技术鉴定纯化病毒的结构蛋白大小及组成、确定基因组核酸的种类、大小及组成。
2、克隆病毒基因组，测序后利用生物信息学的方法进行基因组结构分析。病毒基因组很小，克隆及测序工作不太复杂。
结合上述两种方案可以初步鉴定是哪一种病毒，除了上面这些方法：也可以考虑metagenomics的策略：提取全基因组DNA并纯化，然后测序（454技术），然后生物信息学分析，然后BLAST，然后确定其phylogenetic 地位，最后又可能就鉴定了，但要想发表文章，尤其是发好文章，一定要分离病毒，并作进一步的致病性等分析研究，使结果更可信，更完善。
