高效液相色谱法检测保健食品中茶氨酸
1 范围
建立了高效液相色谱法测定保健食品中茶氨酸含量的方法。
本方法适用于以红茶、绿茶为主要原料的保健食品中茶氨酸的测定。
2 方法原理
用水提取样品中的茶氨酸，等度洗脱，高效液相色谱法分离，用紫外检测器检测，定量测定峰面积或峰高，用外标法计算结果..
3 试剂
注：除特殊说明外，所用试剂均为分析纯。试验用水满足GB/T 6682一级用水要求。
三氟乙酸（C F3COOH）：色谱纯度。
3.2茶氨酸标准品（CAS）：CAS，纯度（＞98%）。
3.3.三氟乙酸水溶液（pH3.0）：取水，加入三氟乙酸至pH3.0。
3.4茶氨酸标准储备液（3.5 mg/ml）：取茶氨酸标准品35.0 mg（精确至0.1 mg），用水溶解，移入10 ml容量瓶中，用水定容至刻度。
3.5茶氨酸标准品使用液：准确吸收茶氨酸标准储备液（3.4）0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，移入10mL容量瓶中，定容至刻度。得到浓度分别为0.07mg/ml、0.14mg/ml、0.21mg/ml、0.28mg/ml和0.35mg/ml的茶氨酸标准溶液。
4 仪器设备
4.1高性能液相色谱仪：配备紫外探测器或二极管阵列检测器。
4.2 恒温水浴锅。
4.3离心机，4000 r/min。
4.4分析平衡：灵敏度1毫克，0.1毫克。
4.5 pH计。
5 分析步骤
5.1固体样品处理：称取适量压碎样品（精确至0.001 g，相当于10 mg茶氨酸），加水30 ml，在80℃恒温水浴中加热40分钟，冷却，离心，过滤，转移至50 ml容量瓶中，水定容至刻度，均匀搅拌。样品溶液为0.45μm以上的水膜，需进行测试。
5.2液体样品的处理：取一定量的样品，在水浴锅中蒸干，残渣溶于水，移入10ml容量瓶中，与水定容混合成刻度。溶液通过0.45μm水膜，需要测量。
5.3 色谱参考条件
5.3.1色谱柱：C18色谱柱，5微米，4.6 x 250 mm或相同效果的色谱柱。
5.3.2 检测波长：203 nm。
5.3.3流动相：三氟乙酸水溶液（3.3）。
5.3.4流速：1.0ml/min。
5.3.5 进样量：10.0 mL。
5.3.6 柱温：35 ℃。
5.4 色谱分析
5.4.1标准曲线的制备：标准溶液的标准浓度(3.5)分别为0.07mg/mL、0.14mg/mL、0.21mg/mL、0.28mg/mL、0.35mg/mL。用标准样品浓度绘制茶氨酸与峰面积的标准回归曲线。
5.4.2样品测定：将样品溶液注入高效液相色谱中，定性测定保留时间和紫外可见吸收光谱，定量测定峰面积。茶氨酸浓度可根据色谱峰面积的标准曲线计算。
6结果计算
6.1试样中茶氨酸的含量
式中：
X样溶液中茶氨酸的含量，g≤100 g；
C—试样溶液中茶氨酸的浓度，mg/mL；
V—试样定容体积，mL；
m—试样质量，g。
6.2计算结果表明，计算结果保留了3位有效数字。
计算结果用重复条件下得到的两个独立结果的算术平均值表示，计算结果保持三位数的有效数。
7 精密度
在重复条件下获得的两个独立测量值之间的绝对差值不超过算术平均值的10%。
8 其他
这种方法的最低可检测量：10纳克。
