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质粒纯度不高的原因

2020.2.26

1 ) 混有蛋白:

不要使用过多菌体。溶液P1、P2、P3 处理并离心后溶液应为澄清的,如果还混有微小蛋白悬浮物,可再次离心去除后再进行下一步骤。

2 ) 混有 RNA :

RNase A处理不彻底,请减少菌体用量或加入溶液P3之后室温放置一段时间。如果溶液P1已保存6 个月以上,请在溶液P1中添加RNase A。

3 ) 混有基因组 DNA :

加入溶液P2和P3后应温和混匀,如果剧烈振荡,可能把基因组DNA剪切成碎片从而混杂在质粒中。如果加入溶液P2后过于粘稠,无法温和混匀,请减少菌体用量。细菌培养时间过长会导致细胞和DNA的降解,不要超过16h。

4 ) 质粒的二聚体和多聚体形式:

质粒复制过程中形成的,与宿主菌相关,电泳可检测出。


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