亮氨酸的药典标准介绍
主要活性成分
L-2-氨基-4-甲基戊酸。按干燥品计算,含C6H13NO2不得少于98.5%。
性状
白色结晶或结晶性粉末;无臭,味微苦。
在甲酸中易溶,在水中略溶,在乙醇或乙醚中极微溶解
比旋度
取本品,精密称定,加6mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含40mg的溶液,依法测定(2010年版药典二部附录Ⅵ E),比旋度为+14.9°至+16.0° [2]
鉴别
(1)取本品与亮氨酸对照品各适量,分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含0.4mg的溶液,作为供试品溶液与对照品溶液。照其他氨基酸项下的色谱条件试验,供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。
(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(《药品红外光谱集》987图)一致。
检查
酸度 取本品0.50g,加水50ml,加热使溶解,放冷至室温,依法测定(2010年版药典二部附录Ⅵ H),pH值应为5.5～6.5。溶液的透光率 取本品0.50g,加水50ml,加热使溶解,放冷至室温,照紫外-可见分光光度法(2010年版药典二部附录Ⅳ A),在430nm的波长处测定透光率,不得低于98.0%。氯化物 取本品0.25g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ A),与标准氯化钠溶液5.0ml制成的对照液比较,不得更浓(0.02%)。硫酸盐 取本品1.0g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ B),与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较,不得更浓(0.02%)。铵盐 取本品0.10g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ K),与标准氯化铵溶液2.0ml制成的对照液比较,不得更深(0.02%)。其他氨基酸 取本品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中约含20mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取1ml,置200ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液;另取亮氨酸对照品与缬氨酸对照品各适量,置同一量瓶中,加水溶解并稀释制成每1ml中各约含0.4mg的溶液,作为系统适用性试验溶液。照薄层色谱法(2010年版药典二部附录Ⅴ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-水-冰醋酸(3:1:1)为展开剂,展开后,晾干,喷以茚三酮的丙酮溶液(1→50),在80℃加热至斑点出现,立即检视。对照溶液应显一个清晰的斑点,系统适用性试验溶液应显两个完全分离的斑点。供试品溶液如显杂质斑点,其颜色与对照溶液的主斑点比较,不得更深(0.5%)。干燥失重 取本品,在105℃干燥3小时,减失重量不得过0.2%(2010年版药典二部附录Ⅷ L)。炽灼残渣 取本品1.0g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ N),遗留残渣不得过0.1%。铁盐 取本品1.5g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ G),与标准铁溶液1.5ml制成的对照液比较,不得更深(0.001%)。重金属 炽灼残渣项下遗留的残渣,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ H 第二法),含重金属不得过百万分之十。砷盐 取本品2.0g,加水5ml,加硫酸1ml与亚硫酸10ml,在水浴上加热至体积约剩2ml,加水5ml,滴加氨试液至对酚酞指示液显中性,加盐酸5ml,加水使成28ml,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ J 第一法),应符合规定(0.0001%)。细菌内毒素 取本品,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅺ E),每1g亮氨酸中含内毒素的量应小于25EU(供注射用)
含量测定
取本品约0.1g,精密称定,加无水甲酸1ml溶解后,加冰醋酸25ml,照电位滴定法(2010年版药典二部附录Ⅶ A),用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于13.12mg的C6H13NO2。
分析方法
方法名称: 亮氨酸测定—电位滴定法
应用范围: 本方法采用滴定法测定亮氨酸的含量。本方法适用于亮氨酸 。
方法原理: 供试品置锥形瓶中,加无水甲酸与冰醋酸溶解后,照电位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定。读出高氯酸滴定液使用量,计算亮氨酸的含量。
试剂:
1.水(新沸放置至室温)
2.高氯酸滴定液(0.1mol/L)
3.结晶紫指示液
4. 无水甲酸
5 .冰醋酸
6. 基准邻苯二甲酸氢钾
仪器设备: 电位滴定仪
试样制备:
①高氯酸滴定液(0.1mol/L)
配制:取无水冰醋酸(按含水量计算,每1g水加醋酐5.22mL)750mL,加入高氯酸(70%-72%)8.5mL,摇匀,在室温下缓缓滴加醋酐23mL,边加边摇,加完后再振摇均匀,放冷,加无水冰醋酸适量使成1000mL,摇匀,放置24小时。若所测供试品易乙酰化,则须用水份测定法测定本页的含水量,再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%-0.2%。
标定:取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g,精密称定,加无水冰醋酸20mL使溶解,加结晶紫指示液1滴,用本液缓缓滴定至蓝色,并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量,算出本液的浓度,即可。
贮藏:置棕色玻璃瓶中,密闭保存。
②结晶紫指示液
取结晶紫0.5g,加冰醋酸100mL使溶解,即得。
操作步骤: 精密称取供试品约0.1g,置锥形瓶中,加无水甲酸1mL溶解后,加冰醋酸25mL,照电位滴定法,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定结果用空白试验校正。记录消耗高氯酸滴定液的体积数(mL),每1mL高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于13.12mg的C6H13NO2。
注1:“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一,“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
