透析法除N- 十二烷基肌氨酸钠实验

2019.9.13

试剂、试剂盒	冰醋酸三氟乙酸（TFA) 乙腈溶剂 A(0.1%TFA) 溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)
仪器、耗材	反相高效液相色谱（HPLC) 仪 C18 反相 HPLC 柱
实验步骤	材料与设备反相高效液相色谱（HPLC) 仪 C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm) 冰醋酸三氟乙酸（TFA)(2% 水溶液储液乙腈溶剂 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龙膜过滤) 溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)（用 0.2-um 的尼龙膜过滤) 操作程序 1）用反相 HPLC 分析透析时和透析后所取的样品（见 P.149)。 2) 各样品取 100ul，加 5ul 冰醋酸，混匀。注：若样品极浑浊或有沉淀，可在进样前用微型离心机离心。 3)C18 柱经 0.1%TFA/水/乙腈系统平衡后，进 50ul 经乙酸调节过的样品，215nm 检测。进样后，用溶剂 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。线性梯度洗脱：10 min 内从 100% 溶剂 A 至 100% 溶剂 B。再用溶剂 B 洗 3 min, 溶剂 A 洗 7 min。 4) 再进一系列稀释的（0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸钠（SKL) 标准品，以 SKL 峰高为浓度的函数作图。根据样品的峰髙计算样品中 SKL 的浓度，并以样品中的 SKL 浓度为时间的函数作图。 5) 色谱柱使用后，先用 20 mlMilli-Q 纯水器制备的水冲洗，接着用 20 ml20% 甲醇冲洗，室温保存。注：用 100 ml 缓冲液 A 和 5 冰醋酸配制一空白样品，按上述方法分析。这可用来校正从柱上洗脱下来的任何溶剂峰。结果典型的反相 HPLC 色谱图，见图 3-6。展开

试剂、试剂盒

冰醋酸三氟乙酸（TFA) 乙腈溶剂 A(0.1%TFA) 溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)

仪器、耗材

反相高效液相色谱（HPLC) 仪 C18 反相 HPLC 柱

实验步骤

材料与设备

反相高效液相色谱（HPLC) 仪

C18 反相 HPLC 柱（VYDAC?,4.6x250 mm)

冰醋酸

三氟乙酸（TFA)(2% 水溶液储液

乙腈

溶剂 A(0.1%TFA)(用 0.2-um 的尼龙膜过滤)

溶剂 B(80% 乙腈+0.086%TFA)（用 0.2-um 的尼龙膜过滤)

操作程序

1）用反相 HPLC 分析透析时和透析后所取的样品（见 P.149)。

2) 各样品取 100ul，加 5ul 冰醋酸，混匀。
注：若样品极浑浊或有沉淀，可在进样前用微型离心机离心。

3)C18 柱经 0.1%TFA/水/乙腈系统平衡后，进 50ul 经乙酸调节过的样品，215nm 检测。进样后，用溶剂 A 洗柱 5 min, 流速 1 ml/min。线性梯度洗脱：10 min 内从 100% 溶剂 A 至 100% 溶剂 B。再用溶剂 B 洗 3 min, 溶剂 A 洗 7 min。

4) 再进一系列稀释的（0.005~0.075%)N-十二烷基肌氧酸钠（SKL) 标准品，以 SKL 峰高为浓度的函数作图。根据样品的峰髙计算样品中 SKL 的浓度，并以样品中的 SKL 浓度为时间的函数作图。

5) 色谱柱使用后，先用 20 mlMilli-Q 纯水器制备的水冲洗，接着用 20 ml20% 甲醇冲洗，室温保存。
注：用 100 ml 缓冲液 A 和 5 冰醋酸配制一空白样品，按上述方法分析。这可用来校正从柱上洗脱下来的任何溶剂峰。

结果

典型的反相 HPLC 色谱图，见图 3-6。

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