凝胶色谱仪的操作使用说明
凝胶色谱仪的操作使用包括凝胶的选择与预处理、色谱柱的选择、装柱、平衡、加样、洗脱、检测、收集和凝胶的保存等。
一、凝胶的选择：
1、根据样品确定分离范围，选择合适的凝胶。
应将大分子完全排阻而小分子完全渗透。
2、颗粒度适当：
颗粒小，分辨率高，但相对流速慢，有时会造成严重扩散。
颗粒大，流速快，分辨率低。
3、根据选择的色谱柱估算出凝胶用量。
二、凝胶的预处理：
在10倍以上的水或洗脱剂中充分溶胀后去悬浮物小颗粒。
三、色谱柱的选择：
色谱柱的直径和长度比一般为1：25～1：100。
四、装柱：
1、将色谱柱洗涤干净。
2、安装色谱柱并调垂直。
3、关闭色谱柱出水口，加入少量洗脱液检漏和排气泡。
4、将处理好的填料缓慢装入柱中，同时打开出水口，控制适当流速。
5、使填料均匀沉降，并不断加入填料溶液。
6、使柱中填料表面平坦，并在表面上留有2～3cm高的缓冲液，关闭出水口。
五、平衡：
色谱柱装好后，要用所需洗脱液（有一定的pH值和离子强度）平衡。
六、加样：
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲击基质，以保持基质表面平坦。
七、洗脱：
注意洗脱时的速率和压力。
八、检测：
检测器检测。
九、收集：
按时间、体积或检测曲线收集。
十、凝胶的保存：
一般是反复洗涤去除蛋白等杂质，然后加入适当的抗菌剂（通常加入0.02%的三氮化钠或置于乙醇溶液中），4℃左右保存。
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