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细胞伤口愈合实验步骤

2022.2.07

1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。

2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中,生长24小时后,单层细胞融合度应达到70-80%。

3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕,划痕横穿过孔,枪头尽量与板孔的底部垂直,不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。

4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕,每孔划痕成十字交叉型。

5.划痕后,用培养基轻轻的清洗板孔2次,以去除脱落细胞。

6.每孔添加新鲜培养基。

7.(培养基中含有某些成分,如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质)

8.细胞生长48小时(或根据时间需要).

9.1xPBS清洗细胞两次,然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。

10.10.1%的结晶紫(2%乙醇溶解)染色30分钟。

11.染色的单层细胞选取不同的视野,显微镜拍照。gap的距离可通过Photoshop或ImagJ软件测量.为了降低实验结果的可变性,建议每孔选择多个视野观察,每组做多个重复。


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