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梯度PCR仪选购建议

2018.10.31

一:引言

1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法,1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源于由Saiki和Mullis等人于1988年发表在Science上的一篇论文,PCR技术是支撑现代分子生物学发展的一块重要基石,这种技术的广泛应用催生了一个庞大的市场。

PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,目前市场上常见的有:普通PCR仪、梯度PCR仪、原位PCR仪、荧光定量PCR仪(qPCR)以及数字PCR仪(dPCR)等。而使用最多是梯度PCR仪和荧光定量PCR仪,生产PCR仪厂家也是不胜枚举,用户认可度最高的有ABI、Roch、Biorad、HealForce等。

笔者将就如何选购一台合适的梯度PCR仪作以下介绍,供大家参考。

二.  选购建议

2.1 精准的温度控制系统

对PCR仪来说,温度控制指标主要是指温度的准确性、均一性、以及升降温速度

温度的准确性:是指样品孔温度与设定温度的一致性,它直接关系到实验的成败。由于PCR是一个几何级数扩增的过程,不论是变性、退火还是延伸都需要准确控制温度,对退火温度而言温控显的尤为重要,有时1°甚至0.5°的差异也能决定实验的成功与失败,所谓差之毫厘,谬之千里。因而对PCR扩增仪而言温度控制就意味着质量。eg:HealForce B960的温度精确性严格控制在≤0.1℃。(国内大部分厂家仅要求≤0.2℃)


温度的均一性:是指样品孔间的温度差异,它关系到在不同样品孔进行反应结果的一致性。有用户发现用同样的样品,同样的PCR反应程序,最后的结果竟然差异非常明显,或许就是因为不同位置的温度不均匀所致。同时位置边缘效应对PCR实验可重复性影响非常明显。eg:HealForce  K960的温度均一性严格控制在单列≤0.2℃

   

升降温速率:更快的升降温速度,可以缩短反应进行的时间,而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间,能提高PCR反应的特异性。eg:HealForce T960 PCR仪标配升降温速度高达5℃的镀金模块,是国内同类厂家中唯一配置镀金模块的。


2.2  仪器的功能性和人性化设计

越友好的操作界面、完善的功能以及人性化的设计更能吸引用户。(热盖、样品座、软件)

热盖:现在的PCR仪一般均配备热盖,热盖温度设为105℃,使样品管顶部的温度达到105℃左右,蒸发的反应液就不会产生凝集在管盖上而改变反应体积,这样用户就无需再向反应管内加石蜡油,直接减少后继反应的麻烦。HealForce热盖温度范围为:20-110℃。


样品座:PCR反应多在0.2或者0.5的管子中进行,多数PCR仪也配备了不同的可更换样品槽适配不同的样品管。HealForce PCR仪一个槽内带有0.2和0.5两种不同样品孔,不需更换基座就可以分别使用两种不同的反应管,或者96孔板,避免了换基座的麻烦。

软件:新的PCR仪都比较注重程序编写的简易性。大屏幕,显示实时信息,倒计时,记忆存储多个程序、自动断电保护等都有助于实验室中的复杂环境使用。HealForce T960和B960 PCR仪基于Windows操作系统,配备了PC端软件,可以实现智能化操控。

ce热盖温度范围为:20-110℃。


三 .结束语

随着生物技术的发展,PCR仪已经发展为实验室通用仪器,因此生产厂家也是如雨后春笋般层出不穷,光是比较参数,就够累了。况且PCR仪还是实验室中的老黄牛,几乎24小时运转,买台可靠的仪器尤为重要。


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