叶绿素含量测定方法
叶绿素是光合作用所必须的物质，没有叶绿素，就不可能正常地进行光合作用，使光能转化为化学能。叶绿素可见于绿色植物，蓝绿藻等生物体，分为叶绿素a，叶绿素b，叶绿素c，叶绿素d四种。叶绿素存在于叶绿体的类囊体内。
叶绿素含量测定的三种方法
叶绿素含量跟光合作用速率、植物营养状况等指标密切相关，通常，我们会通过对叶绿素含量的测定，来了解植物的生长状况。一般，植物叶绿素含量测定有三种：分光光度法，活体叶绿素仪法和光声光谱法。其中分光光度法是应用最广泛的叶绿素含量测定方法。
图 珊瑚树叶片叶绿素在不同提取液中的吸收光谱
1——95% 丙酮2乙醇 2——95% 乙醇
3——80% 丙酮 4——95% 丙酮2乙醇(匀浆)
叶绿素含量的计算
叶绿素含量测定首先得提取叶绿体色素，叶绿体 色素中含有叶绿体a，叶绿体b，胡萝卜素和叶黄素。在提取叶绿体色素时，我们使用不同的试剂，如丙酮，乙醇等有机物。当试剂不同时，所得到的结果也会不 同。上图中我们使用四种不同的溶剂，进行叶绿体色素的提取。图中通过对四种溶剂在600nm-700nm波长间的吸光量进行比较，从而计算叶绿素含量，而 从图中，我们可以大致得到，这四种叶绿素提取液的光吸收性质基本相同。
利用分光光度法测定叶绿素含量是依据Lambert-Beer定律，数学表达式为A=Kbc。其中，A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a,b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别在663nm和645nm处。叶绿素a和b在663nm处的吸光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.67和45.60。根据Lambert-Beer定律，我们可以列出方程：
D663 = 82.04Ca+9.27Cb
D645 = 16.67Ca+45.60Cb
根据以上方程组，可以求得：
Ca = 12.72D663 – 2.59D645
Cb = 22.88D645 – 4.67D663
然后我们又可求得叶绿素总量CT =（D652 × 1000）/ 34.5
上图是不同的叶绿素提取液在提取叶绿素时的进度，可以看出，差别还是挺大的。大家可自己比较下。从图中我们可以发现，95% 丙酮2乙醇(匀浆)的提取效果最佳，因此，我们在进行叶绿素含量测定的时候，可以考虑运用95% 丙酮2乙醇(匀浆)作为提取液。
那么，目前我们已经发明了比较方便的用于测量叶绿素含量的仪器—叶绿素含量测定仪，它是通过测量植物的叶绿素相对含量来了解土壤的性能指标和植物的硝基需求量，并了解植物的生长状况。
图 叶绿素含量测定仪
叶绿素含量测定仪的技术参数
测量对象
| 植物叶片
|
测量方式 | 2波长光学浓度差方式 |
测量面积 | 2mm×3mm |
感应器 | 硅半导体光电二极管 |
显示方式 | 测量值：3位数液晶显示 测量次数：2位数液晶显示 |
测量范围 | 0.0到99.9 SPAD |
记忆容量 | 30个数据，自动计算并显示平均值 |
电源 | 2节AA电池（1.5V） |
电池寿命 | 20000次以上测量 |
测定间隔 | 2秒以下 |
精度 | ±1.0 SPAD单位以内 (室温下，SPAD值介乎0-50) |
重复性 | ±0.3 SPAD单位以内 (SPAD值介乎0-50) |
重现性 | ±0.5 SPAD单位以内 (SPAD值介乎0-50) |
体积（长×宽×高） | 164×78×49mm |
重量 | 225克（不包括电池） |
操作环境 | 0到50℃ |
存储环境 | -20到55℃ |
其他功能 | 警报功能；校准功能 |
标准配置 | 主机、校准卡、主机保护套、电池 |
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