脂质体2000使用说明书及特点
注意事项
推荐在混合前使用Opti-MEM I低血清培养基(Cat. No. 31985-062)稀释 Lipofectamine 2000和核酸。
转染过程中勿向培养基中添加抗生素，以免造成细胞死亡。
不同批实验请保持细胞接种条件相同。
请检测无血清培养基与Lipofectamine 2000的兼容性，因为一些无血清培养 基(如CD293, SFM II, VP-SFM等)可能抑制阳离子脂质体介导的转染。
脂质体RNAi或siRNA转染
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按每孔计算。
1. 转染前一日，将细胞接种于500 μl不含抗生素的培养基中，使其在转染时长 至30-50%融合。
2. 转染液制备，每孔细胞用量如下：
A. 用50 μl Opti-ME I低血清培养基(或者其他无血清培养基)稀释20 pmol siRNA(转染时siRNA终浓度为33 nM)，轻轻混匀。
B. 使用前轻轻摇匀Lipofectamine 2000，然后取1 μl Lipofectamine 2000在 50 μl Opti-ME I培养基中稀释，室温孵育5分钟。注意：请在25分钟内进行下一步操作
C. 将前两步所稀释的DNA和Lipofectamine 2000混合(使总体积为100 μl)， 轻轻混匀，室温放置20分钟(溶液可出现浑浊)。
3. 在每孔细胞中加入100 μl转染液，轻轻摇匀。 37℃培养24-96小时后检测基因表达，转染4-6小时后可更换培养基。
脂质体siRNA转染优化
可调整siRNA与Lipofectamine 2000的用量以优化转染，在24孔板，siRNA可在10-50 pmol之间调整，Lipofectamine 2000可在0.5-1.5 μl之间调整，在增加细胞密度时也应优化转染剂量。更多RNAi转染技巧可参考《成功RNAi七步法》
脂质体DNA转染
下列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，至于其他培养材料，请参考转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与Lipofectamin 2000(μl)的比值为1:2到1:3，转染高密度细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。优化转染是必需的(见优化脂粒DNA转染)。
1. 贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500 μl不含抗生素的培 养基中，在转染时细胞可长至90-95%融合。 悬浮细胞：在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500 μl不含抗生素的培养基中。
2. 转染液制备，每孔细胞用量如下：
A. 用50μl Opti-ME I低血清培养基(或者其他无血清培养基)稀释质粒DNA，轻轻混匀。 B. 使用前轻轻摇匀Lipofectamine 2000，然后取适量Lipofectamine 2000在50 μl Opti-ME I培养基中稀释，室温孵育5分钟。注意：请在25分钟内进行下一步操作。
C. 将前两步所稀释的DNA和Lipofectamine 2000混合(使总体积为100μl)，轻轻混匀，室温放置20分钟(溶液可出现浑浊)。注意：转染复合物常温下可在6小时内保持稳定。
3. 在每孔细胞中加入100 μl转染液，轻轻摇匀。
4. 37℃培养18-48小时后检测基因表达，转染4-6小时后可更换培养基。
5. 对于稳定转染，在转染24小时后以1:10稀释接种于新鲜培养基中，第二天可加入选择培养基。
优化脂质体DNA转染
可通过改变细胞密度、质粒DNA密度和Lipofectamine 2000浓度以优化转染。要保证细胞融合在90%以上，DNA (μg): Lipofectamin 2000 (μl)可在1:0.5到1:5之间进行调整。
转染规模调整
不同培养材料转染液、细胞和培养基的用量按照培养材料面积换算。在96孔板细胞高通量自动分析系统，推荐每孔使用50 μl转染液。注意：在96孔板，可将细胞直接接种于转染液中以实现快速转染，直接在培养板中配制转染液100μl，直接将细胞加入培养板中，其密度为上述方法的2倍，细胞在转染液中可正常贴壁。
产品特点:
Lipofectamine 2000转染真核细胞具有以下优点：
对多种细胞和培养器皿具有很高的转染效率，成功转染的细胞系
核酸-Lipofectamine 2000复合物(转染液)可直接加入细胞培养基中，不管 培养基是否含有血清。
转染后不必去除转染液，或者改变或添加培养基，但转染4-6小时后可去除 转染液。
