液体培养基的保存与使用以及培养基中常见添加物的作用
培养基的保存与使用
液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的PH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月至一年。
注意：
液体培养基应于4℃冰箱避光保存，实验前需放入37℃预热再用。
未加血清液体培养基存放期为12个月，加入血清的液体培养及存放期为6个月。
（液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良，可以再添加适量L-谷氨酰胺。）
液体培养基偶然被冻，可否继续使用？
如果细胞培养基偶然被冻，您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。
培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？
大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。
培养基在使用过程中应注意的问题：
（1）培养基在使用前需37℃预热或在室温平衡后再使用。
（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。
（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。
（4）避免液体间、细胞间的交叉污染。
（5）配制完全培养基时，配制的量最好在2周内用完为好。
关于培养基中的添加物
为什么有的培养基中要去掉酚红？
酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，桃红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色表示碱性pH。但是酚红具有一定的固醇类激素样的作用，如雌激素样作用，尤其对于所培养的哺乳类动物细胞，可能发生的固醇类反应不可忽视。为了避免酚红干扰检测结果，许多研究人员视情况不同来选择是否使用含酚红的培养基。
在培养基中加入HEPES有何好处？
培养基中最常用的缓冲体系是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理pH条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的缓冲剂，能使细胞培养基在pH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。
培养基是否要添加L-glutamine（L-谷氨酰胺）？
对于所有的哺乳类动物细胞而言，L-glutamine（L-谷氨酰胺）是一种必须氨基酸。现在，所有固体包装的培养基都含有L-glutamine，因为L-glutamine在溶液中不稳定，易分解，商品化的液体培养基不含L-glutamine，如果原来培养基中不含L-glutamine 或者L-glutamine 已经降解，应在使用培养基之前加入适量的L-glutamine。各种培养基的L-glutamine的浓度是不同的，比如M199含有0.68mM的L-glutamine，DMEM含有4 mM的L-glutamine。
液体培养基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。
培养基中丙酮酸钠的作用是什么？
细胞通常以葡萄糖作为碳源，丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。如果没有足够的葡萄糖供应，细胞就会选择丙酮酸钠作为代谢底物。丙酮酸是糖酵解途径中一个中间产物，也是EM（Embden Myerhoff）途径的第一步，所以培养基中添加的丙酮酸既可以作为能量的来源也可以为细胞的代谢提供碳骨架。
对于某些特殊的细胞，丙酮酸对维持细胞的生存是必需的，丙酮酸对于某些细胞的繁殖和低血清浓度的增殖也是必不可少。
培养基中的丙酮酸钠浓度一般是0.1 mM，商品化的丙酮酸钠一般是10 mM (100X)的溶液。
