人抑胃肽(活性型)ELISA试剂盒使用说明（一）
前言简介
肠降血糖素是一类胃肠激素, 当人体进食后,能诱导其体内胰岛β细胞释放胰岛素同时抑制胰高血糖素的释放.
GIP是1970年从肠粘膜分离出来的一种典型的的类GLP-1肠降血糖素,称为抑胃肽,后又更名为葡萄糖依赖性促胰岛素肽.它是由43个氨基酸组成的直链肽，属于胰泌素和胰高血糖素族，分子量为5100，由小肠粘膜的K细胞所产生。据报道,GIP受体在很多种细胞内(如胰腺β细胞,
脂肪细胞, 人成骨细胞)都会表达,对机体细胞内营养物质的储存起着至关重要的作用,同时可通过调节GIP信号改善胰岛素抵抗综合症.
血液中的活性型GIP(1-42)能通过二肽基肽酶IV(DPP-IV)作用迅速地失活为GIP (3-42)
此ELISA检测试剂盒仅用于活性型抑胃肽(1-42)的检测
原理
此试剂盒基于夹心法原理，运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与样品中人活性型抑胃肽的量成正比.
检测范围
1.6 - 100 pg/mL (0.3 - 20 pmol/L)
预期用途
仅供科研用
此IBL试剂盒能用于EDTA-血浆中人活性型抑胃肽(GIP)的定量检测
样品收集后需加入二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂,或用特定的方法,确保抑胃肽的完整性.
试剂盒成分
1 预包被板: 抗GIP (C)兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记抗体:
(30倍浓缩)HRP标记抗GIP (N) (6A1A)小鼠IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 人GIP (1-42) 0.5mL x 2
4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 浓缩洗涤液:
(40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1
操作说明
1实验所需器材(但试剂盒没有提供)
酶标仪 微移液管及其吸嘴
量筒及烧杯 去离子水
冰箱(4°C) 坐标纸(log/log)
吸水纸 试管(用于标准品稀释)
温育箱(37°C ± 1°C)
洗瓶(用于洗板)
一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)
2准备
洗涤液的准备
试剂盒的洗涤液是一种40倍浓缩液,用1950 mL稀释50 mL的浓缩洗涤液,制成2000mL即用稀释洗涤液. 置于冰箱内可保存2周.
酶标记抗体的准备
试剂盒中的标记抗体是一种30倍浓缩物,根据所需量用标记抗体稀释液稀释.
示例:
如果你用一条板(8孔),就需800 μL.的标记抗体.就用870 μL的标记抗体稀释液稀释30 μL浓缩液,充分混匀.并每孔各加100 μL
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的稀释标记抗体液需密封瓶装,存于4°C
标准品的准备
加0.5 mL的去离子水到瓶装标准品,制成200 pg/mL的人GIP标准品液
标准品的稀释
准备8支试管,并每支各加230 μL EIA缓冲液.稀释成如下浓度,步骤如下图所示:
试管1 100 pg/mL
试管2 50 pg/mL
试管3 25 pg/mL
试管4 12.5 pg/mL
试管5 6.3 pg/mL
试管6 3.1 pg/mL
试管7 1.6 pg/mL
试管8 0 pg/mL(样品空白对照)
吸取230ul的标准品液于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管混匀，如下图所示,按此规律稀释，第8号管为0 pg/mL作为样品空白对照
样品稀释
样品如需稀释时,必须用EIA缓冲液进行稀释
如果样品中人GIP的浓度范围一无所知的话,预先准备几个不同稀释浓度的样品液来确定最佳的检测浓度.
