组胺ELISA试剂盒使用说明（一）
1、应用范围
此试剂盒可用于人血浆和尿液中组胺的体外定量检测。深化此实验可用于细胞培养上清液的研究。
2、前言说明
组胺（β-咪唑乙胺）是人体中最重要的介质，它主要存在于过敏反应的起始阶段（速发型过敏）。组胺是由组胺酸经脱氨基作用产生的。组胺几乎存在于机体的所有组织中，主要储存于柱状细胞和嗜碱性粒细胞的异染性颗粒中。组胺通常都是以无活性的复合体性存在，只有当需要的时候才会释放。像其它的介质一样，组胺不仅能调节过敏反应的各种临床症状，也可以调节终止过敏反应的一系列效应。组胺在组织中的生物活性是通过三种受体来完成的，它们分别是H1，H2和H3受体。临床检测组胺的方法有：定量检测各种速发型过敏反应中嗜碱性白细胞释放组胺的量，也可以检测过敏药物治疗后各种体液（血浆，尿液，细胞培养上清）中组胺的量。
3、实验原理
此ELISA试剂盒利用的是竞争法的原理。样品中未知量的抗原和一定量的酶标抗原竞争性结合到包被在微孔中的抗体结合位点上。温育后洗板以终止竞争反应。加入底物液后，溶液所显示的颜色强度与样品中抗原的量成反比。样品的实验结果可以从标准曲线上直接获取。
4、储存与稳定性
试剂盒必须在2-8℃的环境下运输和储存，避免太阳直射。样品的储存与稳定性及试剂准备将在相关章节中阐述。如果将包被板密封并储存于2-8℃的环境下时，试剂在有效期内稳定。
5、样品的采集与储存
血浆（EDTA，肝素）
按照静脉穿刺的常规注意事项采集样品，血液样品自采集到实验时都必须保证其化学完整性。不要使用明显溶血、黄疸和脂血样品。混浊的样品应当在实验开始前离心以除去所有的颗粒性物质。 | ||||
储存 | 2-8℃ | ≤-20℃ | ≤-70℃ | 避免太阳直射，避免反复冻融。 |
稳定性 | 5小时 | 3个月 | 2年 |
尿液
实验必须使用自然产生的尿液，也可使用24小时内产生的尿液。收集病人24小时内产生的尿液，并混合于含10-15ml 6N HCl防腐剂的容器中。为了计算结果，请确定尿液的总体积。实验开始前请先将样品离心。 | ||||
自然的尿液 | 酸化尿液 | 避免太阳直射，避免反复冻融。 | ||
储存 | 2-8℃ | 2-8℃ | ≤-20℃ | |
稳定性 | 8小时 | 3天 | 6个月 |
细胞培养上清
使用细胞培养上清作样品，一般没特殊注意事项 细胞培养基内的组胺浓度可能稍微要高些。 |
全血
全血中组胺释放量的检测必须用肝素化全血，具体信息请见相应的说明书（RE95000） |
6、试剂盒成分
注意：试剂盒有足够做96份单孔检测或48份双孔检测所需的试剂成分
数量 | 标记 | 成分 |
1×12×8 | MTP | 包被板，可拆，微孔中包被了羊抗兔抗血清。 |
1×5ml | ANTISERUM | 组胺抗血清，蓝色，即用，内含：兔抗血清、Tris缓冲液和0.01%的硫柳汞 |
1×75ul | ENZCONJ CONC | 酶联物，200倍浓缩，内含辣根过氧酶标记的组胺。 |
7×0.4ml | CAL P A-G LYO | 血浆标准品A-G，冻干，用于血浆样品的定标。内含：组胺、人血浆。具体浓度请见试剂瓶标签或质控单。 |
2×0.4ml | CONTROL P1+2 LYO | 血浆质控1+2，冻干，内含：组胺、人血清。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。 |
1×2.0ml 5×0.25ml | CAL U/C A-F | 尿液/细胞培养标准品A-F，0;2.7;8.1;24.3;73;219ng/ml,即用，用于尿液和细胞培养样品的定标。内含：组胺和0.1M的HCl。 |
2×0.25ml | CONTROL U/C 1+2 | 尿液质控1+2，即用，内含：组胺、人尿液（酸化的）。具体浓度及可允许范围请见试剂瓶标签。 |
1×2.25ml | ACYLREAG | 酰化试剂，即用，内含：DMF |
1×60ml | ASSAYBUF CONC | 检测缓冲液，5倍浓缩，内含Tris缓冲液、吐温、BSA和0.05%的硫柳汞。 |
1×50ml | WASHBUF CONC | 洗涤液，20倍浓缩，内含磷酸缓冲液、吐温和0.1%的硫柳汞。 |
1×10ml | INDICATORBUF | 指示缓冲液，紫色，即用，内含：Tris缓冲液、苯酚（pH＜7.5时颜色会发生改变＝和0.1%的硫柳汞。 |
1×12ml | TMB SUBS | TMB底物液，即用，内含TMB、缓冲液和稳定剂。 |
1×12ml | TMB STOP | TMB终止液，即用，1M的H2SO4。 |
3× | FOIL | 粘性金属板 |
