人抑胃肽(活性型)ELISA试剂盒使用说明（二）
3实验步骤
使用前，将所有试剂应平衡至室温，大约30min，充分混匀，确保试剂质量无改变，标准曲线和样品检测必须同时进行.
| 试剂 | 待检测样品 | 标准品 | 样品空白 | 试剂空白 |
| 检测样品100ul | 稀释标准品（1-7管）100ul | EIA缓冲液（第8管）100ul | EIA缓冲液100ul | |
| 盖板，于37°C下温育60min | ||||
| 洗板4次 | ||||
| 酶标抗体 | 100ul | 100ul | 100ul | - |
| 盖板，于4°C下温育60min | ||||
| 洗板5次 | ||||
| 显色剂 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul |
| 室温避光温育30min | ||||
| 终止液 | 100ul | 100ul | 100ul | 100ul |
| 加终止液后,30min内于450nm处读取OD值 |
1）设试剂空白对照，并于相应的微孔中加入100ul EIA缓冲液
2） 确定好样品空白对照孔，检测样品孔和标准品孔，分别将100ul样品对照品(8号管)、检测样品和稀释好的标准品(1-7号管)加入到相应的微孔中。
3）盖板，37°C下温育60min
4）用洗涤瓶或自动洗板机按以下说明洗板4次
倒去孔内反应液,每孔加满稀释洗涤液洗板,再弃去废液.重复洗板4次.在吸水纸上拍干,去除残留液滴.
5）除试剂空白对照孔外,其余每孔各加100ul酶标抗体
6）盖板，4°C下温育60min
7）按照上述步骤4）洗板5次
8） 用一次性试管取所需量的显色剂，各加100ul显色剂于微孔中.为了避免污染，勿将剩余试剂在倒回试剂瓶中
9）室温避光温育30min，加入显色剂后溶液颜色会变成蓝色
10）每孔各加100ul终止液，溶液颜色会变成黄色
11）擦去微孔板底部的污迹或水滴，确保微孔内溶液无气泡产生.加入终止液后30min内于酶标仪450nm处读取结果
特别注意
收集样品后即尽快检测. 如需保存, 冻存样品,但要避免反复冻融.检测前,将样品解冻至室温.
如样品需稀释,用EIA缓冲液稀释
建议做双份检测
保持样品处于中性PH范围.有机溶剂的污染会影响实验结果
只能用本试剂盒提供的洗涤液洗板.不充足的洗板会导致错误的结果
在吸水纸上拍干去除残留液滴时,切勿用吸水纸刮擦孔内壁
显示剂应避光保存并避免与金属物质接触
加终止液后,30 min内就应读取实验结果
结果计算
所有实验数据(包括标准品,检测样品的OD值),都应减去样品空白对照的OD值.
在log-log坐标纸用,以较正的OD值为纵坐标,相对应的浓度为横坐标,建立标准曲线. 样品直接在标准曲线上获取浓度值.
标准曲线示范
上图所示典型标准曲线仅用于演示示范,不能用于试验数据的获取.每次实验都应建立其标准曲线.
常规事项
1所有试剂置于2 - 8°C保存.实验前将试剂平衡至室温(约30分钟)
2瓶装标准品是冻干品,故小心打开瓶盖
3终止液是强酸物质.使用时,避免其接触皮肤和衣肤.
4弃置用过的物质前,用水冲洗
5 浓缩酶标抗体,EIA缓冲液和浓缩洗涤液可能会出现沉淀,但这并不会影响实验
6使用试剂后应洗手
7切勿混用不同批号的试剂
8别使用过期的试剂
9试剂盒仅供研究用,不能用于临床诊断.
存储与有效期
存储条件:2 - 8°C
有效期见试剂盒外包装
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
