动物骨髓细胞有丝分裂染色体制片材料、原理和步骤-2
2.第3步可省去，改用1ml 注射器直接钻入骨末端即可，避免剪去骨骺时损失过多骨髓细胞；
3.在分离股骨大转子一端时，应防止折断股骨头；
4.如有需要，细胞悬液可用尼龙网过滤，进一步去除骨碎片及杂质。
四、实验结果及思考题
1．在低倍及中倍镜下观察Giemsa染色之后的染色体制片，寻找适当的中期相。
制片应为全部染色体较集中，而各个染色体分散、互不重叠、长短收缩适中、两条单体分开、清楚地显示出着丝点位置、染色体呈红紫色。
2．找出分散适度的中期染色体图象，在油镜下进行仔细观察，熟悉蟾蜍染色体的形态，统计2n的染色体数目。
3．KCl溶液低渗处理与滴片过程在染色体制片中有何联系，对制片结果各有何影响？
4．骨髓细胞染色体标本制作时，为什么要采用冰片滴片？
5．在本实验中造成染色体标本制做不佳的原因有哪些？
1) 秋水仙素用量太多或处理时间过长，会导致染色体的过分凝缩或着丝点裂解，最终会引起染色体形态不正常，甚至被破坏或溶解。
2) 低渗处理不好。低渗液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度，细胞会破裂；低渗不足则染色体在一起，分散不开。
3) 离心速度或离心时间的影响。离心速度过大或离心时间过长，则会引起细胞破裂；反之，离心速度过小或离心时间过短，则细胞沉降不下来，则会引起大量细胞的丢失。
4) 固定液要随用随配，固定彻底后再打散细胞团块，否则细胞容易破碎，染色体分散亦受到影响。
5) 载玻片有油脂或冷却不够，则会影响染色体的附着和铺展。
6) 用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔，用力过大则会造成细胞破裂，而染色体也会弥散在溶液中，在随后的离心中将会丢失。
7) 滴片时的高度很重要，高度过低细胞不会破裂；过高则染色体过于分散甚至丢失，无法辨别出染色体的准确数量。
6． 从一般意义上讲，染色体标本制做的四大要点是什么？
答：A、植物血球凝集素（PHA）处理获得活跃分裂的细胞；
B、秋水仙素处理可使细胞分裂(cell division)停止在中期；
C、低渗处理可使染色体分散；
D、空气干燥法可使染色体平铺在载玻片上。
参考文献：
1．动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析，黄燕 赵小平 余红 陈绍坤 生物学通报BULLETIN OF BIOLOGY 2006 Vol.41 No.1 P.52-53
2．刘涌涛,马全祥,刘慧娟.小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策.生物学通报,2003,38(6):53-54.
3. 牛蛙(Rana catesbeiana)染色体研究 朱传炳 王瑛 激光生物学报摘要 2006-3，15卷3期
4．吴政安.两栖类骨髓细胞的染色体标本制作方法［J］.遗传,1982,4(1):38-39.
正确使用显微镜油镜
普通型生物显微镜的放大倍数可达几百倍。一般真菌和酵母菌等微生物个体较大，用低倍物镜和高倍物镜即可得到良好的效果。但要看到经染色的细菌的形态和真核生物细胞的形态构造，最好使用油镜头。
油镜比干燥系高倍物镜的工作距离短得多，最短的只有0.1 mm，且调焦程序又不同于干燥系物镜，操作时须特别细心，防止油镜压碎标本或损坏油镜。油镜的正确使用方法如下：
先在干燥系高倍物镜下找准被检物，并置于视野中央，然后升高镜筒约1.5
cm，再把油镜头旋转至对准正下方。在玻片标本的镜检部位滴一滴浸液（镜头油），将头偏于一侧观察，下降镜筒，到物镜的前透镜与浸液接触时停止。继而从目镜里细心观察视野，旋转粗准焦螺旋，使镜筒缓慢地上升，刚出现不太清晰的物象时就换用细准焦螺旋，至物象清晰后进行观察。
初次使用油镜，也可按照干燥系物镜的调焦程序调节焦距。即先下降镜筒至物镜最接近盖玻片，但绝不能压在标本上，再上升物镜调焦。但此法有将浸液挤出去和造成空泡的缺点。若上调粗准焦螺旋时，镜筒已升到油浸镜头离开油滴，仍不能发现被检目的物，须重新调节。
油镜使用的镜头油为香柏油或石蜡油。因香柏油黏稠度较高，使用之后擦拭较麻烦，因而许多人采用石蜡油代替使用。滴浸液时，要尽量避免气泡的形成，如果形成了气泡，可用解剖针尖将气泡排在一边，以免影响观察。
油镜使用完毕，提升镜筒约2cm，把油镜转离光轴，先用擦镜纸擦去镜头上的大部分油，再用浸少量二甲苯的擦镜纸擦去镜头上的残余油迹，最后用干擦镜纸擦去镜头上的二甲苯。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周方向擦。玻片标本上的油也要进行清洁，即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，在纸上滴一些二甲苯，趁湿把纸往外拉，这样连续作三四次即可干净（如果是使用石蜡油，清洁时只用擦镜纸不必滴二甲苯）。
