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诱导多能干细胞毒性实验(一)

2020.6.16

优势:
1.  简易、快速的通过检测细胞贴壁面积进行96或384孔板细胞毒性筛选
2.  按照一般微孔读板机的简单流程
3.  具有细胞影像数据,增加数据可信性

药物引起的组织毒性是候选药物未能进入市场的一个重要原因,因此,安全性和有效性试验的高度预测分析是提高药物开发和降低候选药物抗药性的关键。人源诱导多能干细胞(iPSC)衍生的肝细胞和神经元,表现出成体细胞的典型特征和新陈代谢机制,是作为早期药物开发过程中高内涵筛选的理想选择。
虽然使用荧光和化学发光读板机检测标准细胞毒性实验已经众所周知,但是,如果使用细胞成像计数仪进行实际细胞观察会获得更多有用信息。

通过标准存活力实验获得更多信息

细胞存活力染料,如Calcein AM,可以用来检测总化合物在活细胞中的毒性。Calcein AM只在表现出酯酶活性的活细胞内才会发出绿色荧光。iPSC来源的人肝细胞,首先加入不同化合物处理24小时,然后用Calcein AM染色;活细胞图像使用SpectraMax® MiniMax™ Imaging Cytometer获取(SpectraMax® i3多功能检测平台
的升级选项)。活细胞内的绿色胞浆区域使用SoftMax® Pro软件内的细胞增殖分析模块进行鉴定(Figures 1 和 2), IC50值测定使用软件内的曲线拟合函数直接算出(Figure 3)。

Figure 1. 存活力染料的活细胞检测

     20144119962.jpg   20144119287.jpg

     201441110621.jpg   201441110418.jpg

Calcein AM染色的活细胞,使用SoftMax Pro软件内的细胞增殖分析模块进行鉴定,此分析采用计算活细胞覆盖面积占孔面积的百分比。右侧的紫色蒙图(masks)显示出活细胞的分布,可在左侧图片内观察到。

Figure 2. 快速检测细胞增殖率

201441110543.jpg

在肝细胞毒性实验中,通过热图数据结果可以快速显示哪种化合物具有细胞毒性。红色孔是细胞贴壁最多的,而蓝色孔则是贴壁最少的,图中可看出E-H排是细胞毒性最高的,A,M-P排则是无细胞的孔。


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