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诱导多能干细胞毒性实验(二)

2020.6.16

Figure 3. 化合物IC50值由曲线拟合给出

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采用SoftMax Pro软件的曲线拟合功能,确定四种不同的化合物的IC50值。

神经元

神经元的毒性体现在数量减少或神经突触的长度减少上(甚至存在于不影响细胞的数量或存活力的情况下)。通过成像实验不仅可以检测神经元细胞的主体,同时还可以检测神经元细胞的轴突和树突,提供了更多的细胞生长信息。
iPSC-神经元细胞以5,000 cells/孔种于384孔板,培养5天,然后加入按照1:2梯度稀释的视黄酸,四复孔排列,24小时处理,然后固定细胞,并使用AlexaFluor 488标记的微管蛋白抗体染色。
每个观察视野可以观测超过2000个细胞,接近30%的孔面积,然后使用SoftMax Pro软件内的细胞计数分析模块进行分析(Figure 4)。

毒性实验的更多信息

SpectraMax MiniMax 细胞成像系统可以提供细胞图像数据和细胞形态信息,可以补充读板机只有荧光强度的微孔板数据。其他如细胞计数、细胞密度等参数设置在评价化合物的iPSC肝细胞或神经元细胞毒性方面有着很高价值。

Figure 4. 视黄酸对于神经突增生的浓度依赖抑制效应

覆盖 (%)

                            201441111394.jpg201441111336.jpg

Top:随着视黄酸的浓度增加(从上往下,第一排为对照),神经轴突的生长减少。紫色叠图(右列)为识别的细胞和神经轴突。
Right:根据浓度和叠图区域面积进行曲线拟合作图

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